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牛分枝杆菌免疫优势抗原基因的克隆表达及纳米疫苗初步研究

作　者: 马玢
导　师: 王玉炯
学　校: 宁夏大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 牛分枝杆菌优势抗原 Ag85B 纳米疫苗
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 16次
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内容摘要

牛结核病(Bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium Bovis)所引起的慢性致死性人兽共患传染病。它的流行与传播不仅严重影响畜牧业健康稳定发展,造成了巨额的经济损失,而且威胁到人类的健康。研究发现纳米粒子具有缓释性、稳定性、靶向性和安全性等优点,将为预防牛结核病纳米疫苗的研发带来希望。因此,本研究探讨了制备预防牛结核病的新型纳米疫苗,并对其免疫原性进行初步研究。以牛分枝杆菌C68001株基因组DNA为模板,通过分子克隆技术构建免疫优势抗原CFP10,ESAT6,Ag85A和Ag85B的原核表达载体。首先对载体pET-28a-ag85b进行诱导表达和纯化,利用Western blotting进行鉴定。以明胶为载体材料包裹Ag85B蛋白制备纳米疫苗,检测其载药率和包封率,并采用透射电镜对纳米颗粒进行表征分析。以小鼠为实验模型,分别从体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫三方面对制备的纳米疫苗进行初步的免疫原性的研究。本实验结果表明：(1)构建了重组表达质粒pET-28a-cfp10、pET-28a-esat6、pET-28a-ag85a和pET-28a-ag85b和相应的重组基因工程菌株；(2)诱导表达和纯化了重组蛋白Ag85B；(3)制备了以明胶为载体材料载免疫优势抗原蛋白Ag85B的纳米疫苗,该疫苗稳定性好,疫苗颗粒粒径均一,平均粒径在100nm左右；载药率为71.83%,包封率为41.03%,达到了纳米疫苗颗粒的工艺要求；(4)载免疫优势抗原蛋白Ag85B的纳米疫苗能诱发机体产生较高的IgG抗体水平,提高了IFN-γ、IL-2和黏膜slgA的表达量,且表达水平稳定,另外明显增加了胸脾指数。本研究结果表明,所制备的载免疫优势抗原蛋白Ag85B纳米疫苗能有效诱发机体产生较高水平的体液免疫、细胞免疫和局部的黏膜免疫应答,说明所制备的纳米疫苗具有良好的免疫原性,为制备有效预防牛结核病的新型疫苗奠定了理论基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章引言  8-15
  1.1 牛结核病的流行病学概况  8-9
  1.2 牛分枝杆菌几种主要免疫优势抗原的研究进展  9-10
  1.3 牛结核病疫苗的研究进展  10-11
  1.4 纳米疫苗及相关纳米材料的研究进展  11-14
  1.5 本研究的目的和意义  14-15
第二章牛分枝杆菌免疫优势抗原基因重组基因工程菌的构建  15-31
  2.1 引言  15
  2.2 实验材料  15-16
  2.3 实验方法  16-27
  2.4 结果与分析  27-29
  2.5 讨论  29
  2.6 小结  29-31
第三章牛分枝杆菌抗原蛋白Ag85B的表达及纳米疫苗的制备  31-39
  3.1 引言  31
  3.2 实验材料  31-32
  3.3 实验方法  32-34
  3.4 结果与分析  34-37
  3.5 讨论  37-38
  3.6 小结  38-39
第四章载Ag85B蛋白纳米疫苗的免疫原性研究  39-53
  4.1 引言  39
  4.2 实验材料  39-40
  4.3 实验方法  40-44
  4.4 结果与分析  44-51
  4.5 讨论  51-52
  4.6 小结  52-53
第五章结论  53-54
参考文献  54-59

牛分枝杆菌免疫优势抗原基因的克隆表达及纳米疫苗初步研究

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