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结核杆菌蛋白编码基因在不同菌株中的表达水平及意义

作　者: 陈伟
导　师: 袁俐；王远志
学　校: 石河子大学
专　业: 免疫学
关键词: 结核分枝杆菌 Ag85B 38kDa MPT64 实时定量PCR
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的运用实时定量PCR(quantitative real-time, qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB, pstsl, mpt64)的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的上述蛋白抗原在转录水平的差异性及其意义。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB, pstsl, mpt64及内参基因Siga的特异性引物,将fbpB, pstsl, mpt64及Siga扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及梯度稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB, pstsl, mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法。选用46株结核分枝杆菌临床分离株,包括药物敏感菌株24株,耐药菌株22株,北京基因型菌株26株和非北京基因型菌株20株,以及2株非结核分枝杆菌。应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv标准株中fbpB, pstsl, mpt64基因的表达水平。结果耐药菌株中的mpt64基因表达水平低于敏感菌株及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,p<0.01；t=2.545,p<0.05),fbpB, pstsl基因表达水平与敏感组及H37Rv标准株无差异；北京基因型菌株中的pstsl基因表达水平低于非北京基因型菌株及H37Rv标准株,结果有统计学意义(t=2.567,p<0.05；t=2.373,p<0.05),fbpB, mpt64基因表达与非北京基因型组及H37Rv标准株表达无差异。结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和2株非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号。结论结核分枝杆菌菌株中的fbpB基因的表达量在敏感菌株和耐药菌株及北京基因型菌株和非北京基因型菌株均没有差异；结核分枝杆菌耐药菌株中的mpt64基因的表达量低于敏感株及H37Rv,在北京基因型菌株和非北京基因型菌株中的表达量没有差异；结核分枝杆菌北京基因型中pstsl基因的表达量低于非北京基因型及H37Rv,在敏感菌株和耐药菌株中的表达量没有差异。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
英文缩略表  9-10
前言  10-12
材料  12-16
  1. 标本来源  12
  2. 主要仪器设备  12-13
  3. 主要实验试剂  13-14
  4. 常用试剂的配制  14-16
方法  16-24
  1. 结核分枝杆菌的培养  16
  2. 结核分枝杆菌的培养  16-17
  3. RNA逆转录为cDNA  17-18
  4. 标准曲线的建立  18-23
  5. 样品的检测  23-24
结果  24-31
  1. 总RNA的电泳图及Siga,fbpB,psts1及mpt64基因片段的电泳图  24-25
  2. 重组fbpB质粒测序结果及BLAST结果  25-26
  3. Siga重组质粒梯度稀释PCR结果  26
  4. Siga,fbpB,psts1及mpt64标准曲线及溶解曲线  26-28
  5. 结核分枝杆菌不同样品siga基因的扩增曲线  28
  6. 样品检测结果  28-31
讨论  31-35
  1. 我国结核病疫情概况  31
  2. 实时荧光定量PCR在结核分枝杆菌中的应用  31-32
  3. fbpB基因的检测  32-33
  4. psts1基因的检测  33
  5. mpt64基因的检测  33-34
  6. 宿主及蛋白翻译过程的影响  34-35
结论  35-36
综述  36-42
参考文献  42-47
致谢  47-48
作者简介  48-49
导师评阅表  49

结核杆菌蛋白编码基因在不同菌株中的表达水平及意义

内容摘要

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