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白藜芦醇对裸鼠胃癌移植瘤组织中凋亡相关基因PDCD5表达影响的研究

作　者: 吴成富
导　师: 陈奎生；张红新
学　校: 郑州大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 裸鼠 胃癌移植瘤 PDCD5 白藜芦醇 细胞凋亡 免疫组织化学 原位杂交
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


背景和目的胃癌是我省乃至我国常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展是一个多因素、多步骤以及多基因参与的复杂过程。许多研究表明胃癌的发生、发展不但与癌基因、抑癌基因有关,而且还与凋亡相关基因相关。人程序化死亡分子5(the human programmed cell death 5,PDCD5)基因,原名为TFAR19(TF-1 cell apoptosis related gene 19),是由北京大学人类疾病基因中心从人白血病细胞株TF-1细胞中克隆的与凋亡相关的新基因,PDCD5在人类50多种正常组织中存在不同程度的表达,尤其在成年人的心肌、睾丸、肾上腺、肾脏及胎盘中均呈高表达,而在胚胎组织中的表达均远低于成年组织。在人体出现疾病时的组织,特别是肿瘤组织中低表达或不表达。研究表明,PDCD5促进多种细胞凋亡,在凋亡过程中表达增加。外源性的PDCD5经一定方式导入多种细胞系后,其对细胞生物学特征没有产生明显的影响,说明其单独作用效能低。但如果采用化疗药物处理、TRAL处理、撤除细胞因子、撤除血清、射线辐照、抗FAS抗体处理等,均可明显促进细胞凋亡。研究结果表明PDCD5是有效的凋亡促进剂,而非凋亡诱导剂。白藜芦醇(resveratrol,Res)是广泛存在于葡萄、花生、虎杖等药用植物中的多酚类化合物,为一种低毒的天然药物,其对消化、呼吸、生殖、血液等系统来源的肿瘤细胞生长有显著的抑制作用,并可诱导肿瘤细胞凋亡。本课题组已体外观察了白藜芦醇对胃腺癌BGC-823细胞生长的抑制作用以及对BGC-823细胞中PDCD5蛋白和mRNA表达的影响。为进一步深入探讨白藜芦醇对胃癌细胞中凋亡相关基因PDCD5表达的影响,本研究构建裸鼠胃癌移植瘤模型,运用免疫组织化学SP法检测移植瘤组织中PDCD5蛋白表达;采用原位杂交方法检测移植瘤组织中PDCD5 mRNA表达;采用TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡程度。材料和方法1.标本及分组构建裸鼠胃癌移植瘤模型:人胃低分化腺癌BGC-823细胞购自中科院上海细胞生物学研究所。将BGC-823细胞复苏后,实验组采用200μmol/L的白藜芦醇处理BGC-823细胞72h(本课题组体外实验已证实此浓度和此作用时间效果最好),并设空白对照组(培养液对照组),顺铂组(3μg/ml),联合用药组(白藜芦醇200μmol/L+顺铂3μg/ml)。分组将细胞种植于裸鼠皮下,构建裸鼠胃癌移植瘤模型。2.运用免疫细胞化学SP法检测各组胃癌移植瘤组织中PDCD5的蛋白表达。3.应用原位杂交技术检测各组胃癌移植瘤组织中PDCD5的mRNA表达。4.采用TUNEL法检测胃癌移植瘤细胞的凋亡程度。5.采用SPSS 11.0统计软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差((?)±S)表示,两组均数的比较采用t检验(t-test);两组以上均数的比较采用方差分析(ANVOA);以a=0.05为显著性检验标准。结果1.PDCD5蛋白及mRNA在胃癌移植瘤细胞中的表达:PDCD5蛋白定位于胃癌移植瘤组织细胞胞质中,呈棕黄色颗粒;PDCD5 mRNA亦定位于胃癌移植瘤组织细胞胞质中,呈蓝紫色颗粒。2.免疫组织化学:200μmol/L白藜芦醇处理的实验组中PDCD5蛋白表达水平(10.18±0.87)明显高于空白对照组(1.96±0.12),但低于顺铂组(15.20±1.75)和联合用药组(18.93±1.97)。上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)。3.原位杂交:200μmol/L白藜芦醇处理的实验组中PDCD5 mRNA表达水平(8.23±0.79)明显高于空白对照组(1.78±0.10),但低于顺铂组(14.56±1.72)和联合用药组(18.09±1.91)。上述各组两两相比,差异均有显著性(P＜0.05)。4.TUNEL染色:TUNEL法检测到胃癌移植瘤中凋亡细胞的细胞核呈棕褐色,染色深浅不一,染色质分布不均。空白对照组中仅见到少数凋亡细胞,白藜芦醇处理组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡指数依次增加,上述各组两两相比,差异均有显著性(P＜0.05)。结论1.白藜芦醇可上调裸鼠胃癌移植瘤细胞中PDCD5的蛋白表达及mRNA表达,并诱导裸鼠胃癌移植瘤细胞的凋亡。表明其可能通过上调PDCD5的表达进而诱导细胞凋亡。2.联合用药组上调PDCD5的蛋白表达及mRNA表达和诱导细胞凋亡效应最强,表明白藜芦醇可增强顺铂诱导凋亡等作用。

全文目录


摘要  3-6
Abstract  6-11
论文部分 白藜芦醇对裸鼠胃癌移植瘤组织中凋亡相关基因PDCD5表达影响的研究  11-35
  前言  11-12
  材料与方法  12-19
  结果  19-20
  讨论  20-26
  结论  26-27
  附图  27-31
  参考文献  31-35
综述部分 凋亡相关基因PDCD5与肿瘤  35-48
  参考文献  43-48
附录部分  48-49
  中英文缩写词  48-49
  致谢  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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