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Kisspeptin/GPR54系统在下丘脑—垂体—卵巢轴对蛋鸡生殖调控的研究

作　者: 刘延鹏
导　师: 雷治海
学　校: 南京农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: Kisspeptin 下丘脑-垂体-卵巢轴侧脑室注射酶联免疫吸附试验免疫组织化学
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

Kisspeptin是2001年发现的一种神经肽,由KiSS-1基因编码,可水解产生Kisspeptin-54, Kisspeptin-14、Kisspeptin-13和Kisspeptin-10等不同长度的酰胺化短肽,是G蛋白偶联受体54(GPR54)的天然的内源性配体。GPR54属视黄醇家族,是1999年Lee等人在对大鼠脑组织的分离鉴定中发现的。Kisspeptin主要通过其功能性受体GPR54发挥调节作用,具有抑制肿瘤转移、影响神经内分泌、生殖、胎盘的形成、肥胖、糖尿病和心血管疾病等生物学作用。文献中未见kisspeptin在鸡上的研究报道,所以本文以母鸡为研究对象,采用免疫组织化学、体外细胞培养和酶联免疫(ELISA)测定等方法,研究了Kisspeptin和GPR54在鸡脑内的分布定位,侧脑室注射Kisspeptin对鸡血清中LH、FSH和E2水平的影响以及Kisspeptin在体外对青年母鸡下丘脑-垂体-卵巢轴的作用。为Kisspeptin对蛋鸡的生殖调控提供了形态学和生理学试验资料。1用免疫组织化学法研究了Kisspeptin和GPR54在鸡脑内的分布定位。结果显示,Kisspeptin和GPR54的免疫阳性神经元和纤维广泛分布于鸡的间脑和端脑。其中Kisspeptin的免疫阳性神经元主要分布于丘脑背外侧前核、丘脑前外侧核、圆核、海马、新纹体、旧纹体和室旁核,而GPR54的免疫阳性神经元主要分布于海马、新纹体、古纹体和旧纹体等部位。Kisspeptin免疫阳性纤维主要分布于外侧中隔核、内侧中隔核和下丘脑前内／外侧核,GPR54免疫阳性神经纤维主要分布于视交叉上核、丘脑前外侧核、下丘脑背外侧核和丘脑背内侧核等部位。2用体外细胞培养法研究了不同浓度Kisspeptin对鸡下丘脑脑片、腺垂体细胞和卵巢细胞释放有关生殖激素的影响。试验结果表明,高低剂量Kisspeptin都能显著刺激下丘脑脑片中GnRH的释放(P<0.05),且呈剂量依赖式增长。但在垂体细胞和卵巢细胞中,只有高剂量(1000 nmol/L) kisspeptin才能使LH、FSH和E2的释放显著增加(P<0.05)。说明Kisspeptin可直接刺激下丘脑脑片GnRH、腺垂体细胞LH和FSH以及卵巢细胞E2的释放。3用酶联免疫吸附试验研究了侧脑室注射Kisspeptin对鸡血清中LH、FSH和E2水平的影响。结果显示,侧脑室注射外源kisspeptin可引起血清中LH、FSH和E2含量的升高,且能很快达到峰值。对蛋鸡侧脑室注射kisspeptin后,血清中LH和FSH浓度都显著升高,且能持续约1 h,但对血清中E2浓度的提高只维持20 min,随后就快速下降至接近初始水平。

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摘要 6-8ABSTRACT 8-10英文缩写词表 10-11第一篇文献综述 11-31 第一章 kisspeptin及其受体的研究进展 11-24 1 Kisspeptin及其受体的发现 11-12 2 Kisspeptin的结构与分布 12-15 3 Kisspeptin受体的结构与分布定位 15-17 4 Kisspeptin/GPR54系统可能的信号通路 17 5 Kisspeptin的生理功能 17-23 6 K isspeptin的研究意义 23-24 参考文献 24-31第二部分实验研究 31-57 第二章 Kisspeptin/GPR54在鸡脑内的分布定位 31-41 1 材料和方法 31-33 2 结果 33-34 3 讨论 34-40 参考文献 40-41 第三章 kisspeptin在体外对青年母鸡下丘脑-垂体-卵巢轴的影响 41-51 1 材料和方法 41-46 2 结果 46-49 3 讨论 49-50 参考文献 50-51 第四章侧脑室注射kisspeptin对鸡血清中LH、FSH和E_2水平的影响 51-57 1 材料与方法 51-53 2 结果 53-54 3 讨论 54-56 参考文献 56-57全文总结 57-59攻读硕士期间发表的论文 59-61致谢 61

Kisspeptin/GPR54系统在下丘脑—垂体—卵巢轴对蛋鸡生殖调控的研究

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