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纳米二氧化硅颗粒对HL-7702细胞凋亡的影响

作　者: 杜忠君
导　师: 孙志伟
学　校: 吉林大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 纳米二氧化硅 HL-7702 细胞凋亡 线粒体膜电位 细胞色素C Caspase-3
分类号: Q2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 173次
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内容摘要


纳米二氧化硅具有特殊的理化性质,被广泛应用于医药卫生、材料、催化剂及催化载体等领域。人体接触机会和时间日益增加,其安全性问题受到广泛关注。本研究对纳米二氧化硅颗粒致人正常肝细胞系HL-7702细胞凋亡进行了探讨。以人正常肝细胞系HL-7702为模型,研究不同浓度(25、50、100、200μg/mL)的纳米二氧化硅颗粒(60 nm)致HL-7702细胞凋亡。利用倒置生物显微镜观察细胞生长情况;采用HE染色法观察细胞形态变化;吉姆萨(Giemsa)染色法及流式细胞术(FCM)观察纳米二氧化硅对细胞凋亡的影响;罗丹明123(Rhodamin-123,Rh-123)标记FCM检测纳米二氧化硅对线粒体膜电位的影响;免疫细胞化学方法观察凋亡相关蛋白的表达情况。结果显示:HL-7702细胞形态改变;纳米二氧化硅颗粒(25、50、100、200μg/mL),可诱导HL-7702细胞凋亡,作用显著(P<0.01);纳米二氧化硅颗粒(25、50、100、200μg/mL)可引起线粒体膜电位下降,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01);纳米二氧化硅颗粒(25、50、100、200μg/mL)可诱导Bcl-2、Bax、Cyt C及Caspase-3表达,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:不同浓度(25、50、100、200μg/mL)的纳米二氧化硅颗粒(60 nm),可引起HL-7702细胞形态改变,诱导凋亡,其诱导HL-7702细胞凋亡的作用机制可能是通过线粒体途径。本研究为了解纳米二氧化硅的肝毒性,评价纳米二氧化硅的生物安全性提供实验依据。

全文目录


内容提要  4-7
英文缩写  7-8
第1章 绪论  8-18
  1.1 纳米材料概述  8-12
    1.1.1 纳米材料的特性  9-10
    1.1.2 纳米材料生物安全性研究现状  10-12
  1.3 纳米二氧化硅生物效应研究  12-14
    1.3.1 纳米二氧化硅的应用  12-13
    1.3.2 纳米二氧化硅的生物安全性研究现状  13-14
  1.4 细胞凋亡  14-18
    1.4.1 细胞凋亡的概念  14-15
    1.4.2 细胞凋亡的形态学特征  15
    1.4.3 细胞凋亡的线粒体途径  15-18
第2章 材料和方法  18-24
  2.1 试剂和仪器  18-19
    2.1.1 试剂  18
    2.1.2 器材  18
    2.1.3 主要仪器  18-19
    2.1.4 细胞株  19
  2.2 实验方法  19-24
    2.2.1 细胞培养  19-20
    2.2.2 透射电镜与粒度及Zeta 电位分析仪对纳米二氧化硅进行表征  20
    2.2.3 细胞形态学观察  20-21
    2.2.4 纳米二氧化硅诱导HL-7702 细胞凋亡的检测  21-22
    2.2.5 Rhodamine-123 标记流式细胞术检测线粒体跨膜电位  22
    2.2.6 免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白的表达  22-23
    2.2.7 统计学分析  23-24
第3章 实验结果  24-38
  3.1 纳米二氧化硅颗粒的表征  24
  3.2 纳米二氧化硅颗粒对细胞形态学影响  24-26
    3.2.1 倒置显微镜观察HL-7702 细胞形态改变  24-25
    3.2.2 HE 染色光学显微镜下观察HL-7702 细胞的形态学改变  25-26
  3.3 纳米二氧化硅颗粒对细胞凋亡的影响  26-29
    3.3.1 吉姆萨（Giemsa）染色方法检测细胞凋亡  26-28
    3.3.2 流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡  28-29
  3.4 纳米二氧化硅颗粒对线粒体膜电位的影响  29-30
  3.5 纳米二氧化硅颗粒对HL-7702 细胞凋亡相关蛋白表达的影响  30-38
    3.5.1 纳米二氧化硅颗粒对HL-7702 细胞Bax、Bcl-2 的影响  30-33
    3.5.2 纳米二氧化硅颗粒对HL-7702 细胞Cyt C 的影响  33-35
    3.5.3 纳米二氧化硅颗粒对HL-7702 细胞Caspase-3 的影响  35-38
第4章 讨论  38-43
  4.1 纳米二氧化硅的表征  38
  4.2 纳米二氧化硅诱导HL-7702 细胞凋亡  38-40
    4.2.1 对细胞形态学的影响  38-39
    4.2.2 诱导HL-7702 细胞凋亡  39-40
  4.3 纳米二氧化硅对HL-7702 细胞线粒体膜电位的影响  40-41
  4.4 纳米二氧化硅对HL-7702 细胞凋亡相关蛋白表达的影响  41-43
第5章 结论  43-44
参考文献  44-51
致谢  51-52
中文摘要  52-54
ABSTRACT  54-55

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中图分类: > 生物科学 > 细胞生物学
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