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Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究

作　者: 赵震宇
导　师: 张铀
学　校: 昆明医学院
专　业: 血液内科学
关键词: Survivin基因 RNA干扰 细胞凋亡 急性髓细胞白血病
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 6次
引　用: 0次
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内容摘要


目的：本研究通过构建Survivin特异性shRNA(short hairpin RNA)真核表达载体、利用Lipofectamine 2000TM脂质体转染到HL-60细胞,研究Survivin基因对白血病细胞凋亡及阿糖胞苷敏感性的影响。方法：(1)通过半定量RT-PCR扩增和定向克隆技术构建重组真核表达载体pshRNA-Survivin1(阳性)、pshRNA-Survivin2(阴性)。(2)实验分六组：空白实验组,Ara-C组,pshRNA-Survivin1(阳性)组,pshRNA-Survivin2(阴性)组,pshRNA-Survivin1(阳性)+Ara-C组pshRNA-Survivin2(阴性)+Ara-C组。(3)用无内毒素质粒大提试剂盒提取质粒,通过脂质体的介导转染HL-60细胞。(4)转染48h后,通过RT-PCR检测HL-60细胞中Survivin mRNA的表达,并通过流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.(5)所得数据采用SSPS11.0统计软件进行分析,计量资料统计学数据用均数±标准差(X±S)表示。检验标准以P<0.05为有统计学意义。结果：(1)成功构建了重组质粒载体pshRNA-Survivin1(阳性)、pshRNA-Survivin2(阴性),经测序证实插入的ShRNA-Survivin序列正确。(2)通过RT-PCR检测HL-60细胞中Survivin mRNA的表达结果为：空白实验组,Ara-C组,转染pshRNA-Survivin1 (阳性)质粒组,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒组,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒+Ara-C组,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒+Ara-C组的Survivin mRNA的相对表达量分别为0.83±0.01,0.80±0.02,0.35±0.02,0.77±0.01,0.17±0.01,0.75±0.02。同空白实验组比,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒组细胞的Survivin mRNA表达抑制率为57.8%,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒加阿糖胞苷组细胞的Survivin mRNA表达抑制率为79.5%。表明shRNA对HL-60细胞中的Survivin mRNA表达抑制是高效特异的,同时提高了HL-60细胞对阿糖胞苷的敏感性,差异具有统计学意义(P＜0.05)。(3)通过流式细胞仪检测细胞的凋亡,结果显示六组的凋亡指数分别为：空白实验组：基本无凋亡,Ara-C组：5.09±0.30%,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒组：5.87±0.38%,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒组：2.78±0.30%,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒+Ara-C组12.4±0.38%,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒+Ara-C组：8.80±0.32%,差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论：(1) Survivin特异性shRNA真核表达载体构建成功。(2)转染Survivin特异性shRNA真核表达载体后,HL-60细胞中的Survivin mRNA表达受到抑制。(3)利用RNA干扰Survivin基因后,可以提高HL-60细胞对阿糖胞苷的敏感性,促进细胞凋亡(4)利用RNA干扰技术抑制Survivin基因可能是白血病基因治疗的一种有效途径。

全文目录


中文摘要  6-8
Abstract  8-10
1.前言  10-11
2.材料和方法  11-20
3.结果  20-25
4.讨论  25-30
5.结论  30-31
6.参考文献  31-35
论文综述  35-42
  参考文献  40-42
攻读学位期间发表文章目录  42-43
致谢  43

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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