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目的：探讨威灵仙皂苷对NB4细胞的凋亡诱导作用和可能机制及对PML-RARa mRNA的影响,并探讨其用于白血病治疗的可能性,为开发新的抗肿瘤新药提供理论依据。方法：根据文献提取威灵仙皂苷,以0.01%DMSO为阴性对照,1.0umol/l的三氧化二砷为阳性对照,各个浓度的威灵仙皂苷为实验组。将0.01%DMSO、1.0umol/l的三氧化二砷及不同浓度的威灵仙皂苷分别加入NB4细胞培养液中培养,使皂苷在反应体系中的终浓度为10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml,每组五个平行对照,并重复三次实验。取出培养24、48、72小时后的NB4细胞,加入MTT液,测量A值,计算细胞生长抑制率及IC50值,找出最适浓度。将NB4细胞分别加入含30ug/ml威灵仙皂苷、0.01%DMSO、1.0umol/l三氧化二砷的培养体系中培养,分别培养24、48、72小时后(每组三个平行对照,并重复试验三次),采用Wright’s-Giemsa染色各组NB4细胞,并在光学显微镜下观察细胞形态变化并照相。将NB4细胞分别加入含30ug/ml威灵仙皂苷、0.01%DMSO、1.0umol/l三氧化二砷的培养体系中培养,分别培养24、48小时后(每组三个平行对照,并重复试验三次),取1×105个细胞,加入500ul的Binding Buffer悬浮细胞,加入5ul Annexin V-FITC混匀后,加入5ul Propidium iodide混匀,室温、避光、反应20min,用流式细胞仪检测凋亡率。将NB4细胞分别加入含30ug/ml威灵仙皂苷、0.01%DMSO的培养体系中培养,分别培养24、48小时后(每组三个平行对照,并重复试验三次),取1×105个细胞经75%乙醇固定后,加入含RNA酶的PI染液,检测细胞周期分布。将NB4细胞分别加入含30ug/ml威灵仙皂苷、0.01%DMSO的培养体系中培养,分别培养24、48、72小时后(每组三个平行对照,并重复试验三次),取1×106个细胞提取RNA,用Real-time PCR法检测NB4细胞中的PML-RARa mRNA。结果：不同浓度的威灵仙皂苷作用细胞后,均能抑制细胞生长,且随药物浓度及干预时间的延长,抑制率逐渐增加,两两比较P<0.05,差异有统计学意义,但抑制率小于三氧化二砷组。经计算各时间段皂苷的IC50值分别为：干预24小时组为：247.91ug/ml；干预48小时组为：30ug/ml；干预72小时组为4.00ug/ml ,选择浓度为30ug/ml的皂苷为最适浓度。威灵仙皂苷作用的NB4细胞,经形态学检查发现细胞体积变小,细胞核高度浓缩聚集,甚至断裂形成凋亡小体,胞浆疏松、空泡化,与三氧化二砷组有同样的变化。威灵仙皂苷作用的NB4细胞经流式细胞仪检测发现,凋亡率也随干预时间的延长而增加,与之前实验有同样的改变,组间p<0.05,差异有统计学意义,但凋亡率小于三氧化二砷组。威灵仙皂苷作用的NB4细胞经流式细胞仪检测发现细胞周期大多阻滞于G2期,且以皂苷干预48小时组较明显,统计学分析P<0.05,差异有统计学意义。威灵仙皂苷作用后的NB4细胞PML-RARa mRNA的表达,药物作用前后差异无统计学意义(P>0.05),且随时间变化差异也无统计学意义(P>0.05),表明威灵仙皂苷不影响PML-RARa mRNA的表达。结论：威灵仙皂苷能抑制细胞生长,且呈时间和浓度依赖性。威灵仙皂苷能诱导细胞凋亡,呈明显时间依赖性,但凋亡率小于三氧化二砷组。威灵仙皂苷抑制细胞生长和诱导凋亡的最适浓度和最佳作用时间分别是30ug/ml和48小时。威灵仙皂苷诱导细胞凋亡的机制可能是通过细胞周期阻滞,阻滞于G：期,而后诱导细胞凋亡。威灵仙皂苷不影响PML-RARa mRNA的表达。
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