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榄香烯对人肝癌HepG-2细胞拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ的影响

作　者: 龚敏
导　师: 崔晓楠
学　校: 大连医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 榄香烯 HepG-2细胞 细胞凋亡 TOPOⅠ TOPOⅡ
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的目前化疗药物对肝癌有效率不超过20%。靶向药物,如sorofenib、erlotinib等未能改变肝癌治疗现状。因而探索高效低毒的抗肝癌药物历来是医学关注的热点。榄香烯(elemene,ELE )是从活血化瘀中药姜科植物温莪术中提取出的抗癌活性单体,研究表明ELE对多种肿瘤具有抑制作用,表现出高效低毒的中药特质,尤其对肝癌显示出良好临床疗效。然而机制有待探索。DNA拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ(topoisomeraseⅠ、topoisomeraseⅡ,TOPOⅠ、TOPOⅡ)是调节核酸拓扑构型的关键酶,是目前抗肿瘤重要靶位,目前尚无ELE与TOPOⅠ、TOPOⅡ关系的报道。本研究旨在探讨榄香烯(elemene,ELE )对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡以及DNA拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ(TOPOⅠ、TOPOⅡ)表达的影响。方法采用倒置显微镜观察ELE对人肝癌HepG-2细胞形态学的影响;采用噻唑蓝还原法(MTT)观察ELE对HepG-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测ELE对HepG-2细胞周期的影响;采用AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;采用RT-PCR法检测ELE对HepG-2细胞TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA表达的影响;采用Western-Blot法检测ELE对HepG-2细胞TOPOⅠ和TOPOⅡ蛋白表达的影响;采用TOPOⅠ介导的负超螺旋PBR322DNA解旋反应检测ELE对TOPOⅠ酶活性的影响;采用TOPOⅡ介导的kDNA去连环作用检测ELE对TOPOⅡ活性的影响;采用负超螺旋PBR322DNA和kDNA分别检测ELE对DNA的直接抑制作用。结果在倒置光学显微镜下,观察到ElE在体外可以明显抑制人肝癌HepG-2细胞的生长。培养72 h后对照组细胞为贴壁的梭形细胞,细胞排列紧密。而加入不同浓度的ElE干预的HepG-2细胞,随着浓度增加,细胞体积逐级缩小,胞膜皱折,核浆比例减小,核边聚伴有碎裂,原来堆积成团的HepG-2细胞结合力下降,松散成个体漂浮,散在分布。视野内可见细胞崩解碎片增多。ELE抑制HepG-2细胞增殖,呈时间和剂量依赖性,药物作用24 h、48 h和72 h后,IC 50值分别为96.13μg/ml、80.84μg/ml和60.95μg/ml;阻滞HepG-2细胞于S期,诱导细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性;下调TOPOⅠ、TOPOⅡmRNA及蛋白的表达,呈剂量依赖性;对TOPOⅠ介导的负超螺旋PBR322DNA解旋反应有抑制作用;对TOPOⅡ介导的kDNA去连环作用有抑制作用;对负超螺旋PBR322DNA和kDNA没有直接断裂作用。结论ELE能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导细胞凋亡。下调TOPOⅠ、TOPOⅡ表达及影响DNA拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ酶的活性可能是其机制之一。

全文目录


摘要  6-8Abstract  8-10前言  10材料与方法  10-15结果  15-22讨论  22-24结论  24-25参考文献  25-27综述  27-34  参考文献  32-34附录  34-35  缩略语表  34-35致谢  35

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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