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重组人组织因子途径抑制物2的大规模发酵及纯化的研究

作　者: 于敬
导　师: 颜炜群
学　校: 吉林大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 组织因子途径抑制物-2 大规模发酵毕赤酵母纯化
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2, TFPI-2)是新近发现的一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。体外实验发现,TFPI-2可抑制纤溶酶、胰蛋白酶、基质金属蛋白酶-1(matrix metallo proteina se-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、因子Ⅶa和组织因子复合物(FⅦa-TF)等多种蛋白酶,在维持细胞基质重塑及血管生成、调控肿瘤细胞侵袭转移、调节血液凝固及细胞凋亡等方面可能具有重要作用。目前,国外研究已发现,TFPI-2表达与许多恶性肿瘤的侵袭转移密切相关。本研究通过已构建的重组人TFPI-2(rhTFPI-2)毕赤酵母真核表达体系,首次利用80L发酵罐优化发酵条件,采用甲醇诱导批式发酵,摸索出其最佳发酵条件,大量制备和纯化rhTFPI-2,用于生物活性的研究。结果表明,经甲醇诱导可分泌大量的具有胰蛋白酶抑制活性的rhTFPI-2蛋白,发酵液pH6.2的条件下,甲醇诱导表达72h时放罐较为适宜,其产量可达970mg·L-1,纯化后蛋白纯度为95%,回收率为58%。国内外文献未见相关报道。本研究为下一步进行工业化生产及进一步探究rhTFPI-2潜在的临床应用提供了实验依据。

全文目录

提要  4-6
1. 绪论  6-24
  1.1 TFPI-2 的发现和命名  6
  1.2 TFPI-2 基因及蛋白结构  6-9
  1.3 TFPI-2 基因的表达调控  9-10
  1.4 TFPI-2 分布及生理功能  10-11
  1.5 TFPI-2 的生物学特性  11-12
  1.6 TFPI-2 与肿瘤的关系  12-15
  1.7 TFPI-2 的应用前景  15
  1.8 TFPI-2 的重组制备  15-24
2.RHTFPI-2 小规模发酵条件优化  24-36
  2.1 材料和方法  24-30
  2.2 实验结果  30-34
  2.3 讨论  34-36
3.RHTFPI-2 大规模发酵及纯化  36-52
  3.1 材料和方法  36-42
  3.2 实验结果  42-48
  3.3 讨论  48-51
  3.4 研究总结  51-52
参考文献  52-62
英文缩略词表  62-63
中文摘要  63-65
Abstract  65-67
致谢  67

重组人组织因子途径抑制物2的大规模发酵及纯化的研究

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