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苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究

作　者: 刘春平
导　师: 王振宇
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 生物化工
关键词: 苹果多酚分离纯化 γ射线免疫系统
分类号: S661.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 86次
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内容摘要

本课题以苹果多酚作为研究对象,对其提取工艺进行优化,通过大孔树脂对其进行分离纯化,并对苹果多酚的抗辐射作用进行了深入研究。用超声波辅助提取方法提取嘎拉苹果中的多酚物质,以响应面分析方法优化提取工艺,得到苹果多酚的最佳提取条件:超声波时间37.51min、温度41.18℃、丙酮浓度69.36%、料液比1:5.21,在此条件下苹果多酚得率理论值可达1.17mg/g。经超声波辅助提取,乙醇沉降除杂处理,得到苹果多酚水溶液粗品,再利用大孔树脂AB-8进行分离纯化,可得到具有苹果清香的苹果多酚粉末,福林酚法测定其纯度为79.5%,收率可达到65.1%。再采用顶空气相色谱法检测所得苹果多酚纯化物中正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯等有机溶剂残留均低于检测限。采用DPPH法、甲基紫法及邻苯三酚自氧化法,分别研究了苹果多酚纯化物清除DPPH自由基、超氧阴离子及羟自由基的能力,实验结果表明:超声波辅助提取及大孔树脂纯化得到的苹果多酚对DPPH自由基、超氧阴离子及羟自由基具有明显的清除作用,其中苹果多酚的IC50值分别可达到0.0034mg/mL、2.86mg/mL、0.75mg/mL。构建辐射模型,确定5Gyγ射线为辐射对免疫系统损伤研究的最佳剂量。利用5Gyγ射线对小白鼠进行照射,照射前补充苹果多酚纯化物后,小鼠碳廓清指数、血清溶血素含量、脾指数、DTH足跖增厚程度、MDA含量、SOD及GSH-Px比照射对照组有所改善,其中1000mg/kg/d剂量组有统计学意义。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第1章绪论  8-20
  1.1 立题背景  8-9
  1.2 苹果多酚的国内外研究现状  9-14
    1.2.1 苹果多酚提取工艺的研究  9
    1.2.2 苹果多酚分离和纯化的研究  9-11
    1.2.3 苹果多酚在医药、食品及化妆品领域的应用  11-12
    1.2.4 苹果多酚的抗氧化及抗辐射作用研究  12-14
  1.3 国内外抗辐射作用的研究方法  14-19
    1.3.1 抗辐射作用体内氧化功能的研究方法  14-15
    1.3.2 抗辐射作用血液系统的研究方法  15-16
    1.3.3 抗辐射作用骨髓造血系统的研究方法  16-17
    1.3.4 抗辐射作用免疫系统的研究方法  17-19
  1.4 本课题的研究目的及意义  19
  1.5 课题主要研究内容  19-20
第2章材料与方法  20-31
  2.1 实验试剂及材料  20-21
  2.2 实验仪器及设备  21-22
  2.3 测定方法  22-24
    2.3.1 福林酚方法  22
    2.3.2 苯酚-硫酸方法  22
    2.3.3 考马斯亮蓝方法  22-23
    2.3.4 碳廓清指数的测定方法  23
    2.3.5 血清溶血素含量的测定方法  23-24
    2.3.6 脾指数测定方法  24
    2.3.7 迟发性变态反应程度的测定方法  24
    2.3.8 小白鼠存活率的测定方法  24
    2.3.9 SOD、MDA、GSH-Px的测定方法  24
  2.4 苹果多酚超声波辅助提取及分离纯化方法  24-27
    2.4.1 苹果多酚超声波辅助提取工艺路线  24-25
    2.4.2 超声波辅助提取苹果多酚的单因素最佳条件确定  25
    2.4.3 响应面分析优化超声波辅助提取苹果多酚的工艺参数  25
    2.4.4 苹果多酚粗提物除杂条件的确定方法  25-26
    2.4.5 苹果多酚的大孔树脂AB-8 纯化研究方法  26-27
    2.4.6 顶空气相色谱法检测AB-8 大孔树脂有机溶剂残留物的方法  27
  2.5 苹果多酚体外抗氧化作用研究方法  27-29
    2.5.1 苹果多酚对DPPH自由基清除作用的测定方法  27-28
    2.5.2 苹果多酚对超氧阴离子清除作用的测定方法  28
    2.5.3 苹果多酚对羟基自由基的清除作用的测定方法  28-29
  2.6 苹果多酚抗辐射作用研究方法  29-31
    2.6.1 辐射对免疫系统损伤模型构建方法  29-30
    2.6.2 苹果多酚对辐射引起的免疫损伤的保护作用  30
    2.6.3 苹果多酚对辐射诱导氧化损伤的保护作用  30-31
第3章苹果多酚超声波辅助提取及分离纯化研究  31-49
  3.1 苹果多酚超声波辅助提取工艺条件确定  31-42
    3.1.1 福林酚法测定的苹果多酚含量标准曲线  31
    3.1.2 苯酚-硫酸法测定的总糖含量标准曲线  31-32
    3.1.3 考马斯亮蓝法测定的蛋白质含量标准曲线  32-33
    3.1.4 超声波辅助提取苹果多酚的单因素最佳条件确定  33-36
    3.1.5 响应面分析优化超声波辅助提取苹果多酚的工艺参数  36-42
  3.2 苹果多酚粗提物除杂条件确定  42
  3.3 苹果多酚粗提物纯化条件确定  42-47
    3.3.1 时间对苹果多酚静态吸附的影响  42-43
    3.3.2 解析剂种类对苹果多酚静态解析的影响  43
    3.3.3 解析剂浓度对苹果多酚静态解析的影响  43-44
    3.3.4 供试液苹果多酚含量对吸附效果的影响  44-45
    3.3.5 供试液苹果多酚进样速度对吸附效果的影响  45
    3.3.6 洗脱剂流速对解吸率的影响  45-46
    3.3.7 动态洗脱曲线  46-47
  3.4 顶空气相色谱法检测AB-8 大孔树脂有机溶剂残留物  47-48
  3.5 本章小结  48-49
第4章苹果多酚体外抗氧化作用研究  49-53
  4.1 苹果多酚对DPPH自由基清除作用的测定  49-50
  4.2 苹果多酚对超氧阴离子清除作用的测定  50
  4.3 苹果多酚对羟基自由基的清除作用的测定  50-52
  4.4 本章小结  52-53
第5章苹果多酚抗辐射作用研究  53-61
  5.1 辐射对免疫系统损伤模型构建  53-55
    5.1.1 不同辐射剂量对碳廓清指数的影响  53
    5.1.2 不同辐射剂量对血清溶血素的影响  53-54
    5.1.3 不同辐射剂量对脾指数的影响  54
    5.1.4 不同辐射剂量对迟发性变态反应程度的影响  54-55
    5.1.5 不同辐射剂量对小白鼠存活率的影响  55
  5.2 苹果多酚对辐射引起的免疫系统损伤的保护作用  55-58
    5.2.1 苹果多酚对辐射小鼠碳廓清指数的影响  55-56
    5.2.2 苹果多酚对辐射小鼠血清溶血素含量的影响  56
    5.2.3 苹果多酚对辐射小鼠脾指数的影响  56-57
    5.2.4 苹果多酚对辐射小鼠迟发性变态反应程度的影响  57-58
  5.3 苹果多酚对辐射诱导氧化损伤的保护作用  58-60
    5.3.1 苹果多酚对γ射线辐射小鼠肝组织中SOD活性的影响  58
    5.3.2 苹果多酚对γ射线辐射小鼠肝组织中GSH-Px活性的影响  58-59
    5.3.3 苹果多酚对γ射线辐射小鼠肝组织中MDA含量的影响  59-60
  5.4 本章小结  60-61
结论  61-62
参考文献  62-67
致谢  67

苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究

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