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翡翠贻贝糖胺聚糖降血脂作用的研究

作　者: 李孟婕
导　师: 吴红棉
学　校: 广东海洋大学
专　业: 水产品加工及贮藏工程
关键词: 翡翠贻贝 糖胺聚糖 纯化 降血脂 脂质代谢 抗氧化
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


翡翠贻贝（Perna viridis）别名青口螺,广泛分布于东海南部和南海,其繁殖能力很强,易于养殖。但由于缺乏市场及有效的加工手段,其资源未能得到充分的利用。动脉粥样硬化、脂肪肝、心脑血管疾病己成为危害人类健康的主要疾病,而脂质代谢异常,特别是血胆固醇水平升高是基本易患因素。因此,如何有效调节血脂,是目前营养学研究的热点之一。本论文研究了翡翠贻贝糖胺聚糖的分离纯化条件及其理化性质,探讨翡翠贻贝糖胺聚糖对高脂小鼠机体血脂的调节作用,同时研究了翡翠贻贝糖胺聚糖对高脂小鼠抗氧化能力的影响,以期为翡翠贻贝糖胺聚糖营养价值评价的建立提供理论依据,为翡翠贻贝的开发提供参考,为贝类的发展做出一定贡献。主要研究内容如下:（1）在最优条件下大量提取糖胺聚糖粗品（PVG）,通过等电点除蛋白、超滤浓缩得精制品（PVG-1）,并采用DEAE-52纤维素离子交换柱层析法对精制品进行纯化,分离出来含量较高的两个极分（PVG-1-1,PVG-1-3）,再经过Sephadex G-200凝胶柱进行进一步分离纯化,得到两个极分（PVG-1-1a,PVG-1-3a）。检测各组分的组成成分,PVG、PVG-1、PVG-1-1、PVG-1-3、PVG-1-1a、PVG-1-3a测定的总糖含量分别是20.34%、26.51%、40.64%、37.56%、49.56%、43.12%;糖胺聚糖含量分别是26.81%、45.36%、66.78%、60.45%、75.56%、69.78%;总蛋白含量分别是33.43%、18.12%、13.85%、11.89%、10.75%、8.45%;硫酸基含量分别是4.53%、6.89%、12.47%、14.85%、19.65%、21.56%;氨基半乳糖含量分别是2.32%、3.71%、6.64%、8.65%、7.67%、10.56%;糖醛酸含量分别是5.88%、7.89%、12.78%、10.67%、19.85%、16.56%;氨基己糖含量分别为10.21%、19.36%、29.61%、33.42%、35.67%、39.67%,并用高效液相对PVG-1-1a、PVG-1-3a纯度进行鉴定,各有一个吸收峰,说明为均一多糖。用高效液相色谱法对PVG-1-1a、PVG-1-3a进行分子量测定,PVG-1-1a、PVG-1-3平均相对分子质量为5.20×105Da和2.58×105Da;采用红外光谱法分析PVG-1-1a、PVG-1-3a特征基团和结构等,PVG-1-1a、PVG-1-3a都有氨基多糖的特征吸收。（2）取雄性昆明小鼠72只,每组12只。随机分正常对照组（灌饲生理盐水）、模型对照组（灌饲生理盐水）、阳性对照组（灌饲辛伐他汀5mg/kg）、翡翠贻贝糖胺聚糖低剂量组（50mg/kg）、中剂量组（100mg/kg）、高剂量组（200mg/kg）。正常对照组动物从试验开始至结束用普通饲料喂养,其他五组动物均喂高脂饲料。30d后测定小鼠血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和一氧化氮（NO）含量,肝脏TC、TG含量,血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）以及血清和肝脏脂蛋白脂酶（LPL）、肝脂酶（HL）活性。结果表明翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠体重增长无影响（P﹥0.05）,中、高剂量组可以提高肝指数（P﹤0. 05）,降低肾指数（P﹤0.05）。翡翠贻贝糖胺聚糖中、高剂量组能明显降低模型小鼠血清TC,TG,LDL-C含量和动脉粥样硬化指数（AI）（P﹤0.01）,显著降低肝脏TC（P﹤0.01）、TG（P﹤0.01）含量,提高血清HDL-C和NO（P﹤0.01）含量,提高血清LCAT,血清和肝脏HPL、HL（P﹤0.05或P﹤0.01）活性。说明翡翠贻贝糖胺聚糖有显著的降血脂效应,该作用可能与翡翠贻贝糖胺聚糖能明显增强LCAT、LPL、HL酶活性,提高HDL-C、NO水平有关。（3）翡翠贻贝糖胺聚糖体外抗氧化作用研究:以抗氧化剂维生素C为对照,选用OH自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基和体外抗肝组织自发性脂质过氧化清除实验来验证翡翠贻贝糖胺聚糖体外抗氧化作用的强弱。当PVG-1浓度达到8mg/mL时,对·OH的清除率最高,为55.17%,同样浓度下PVG的·OH清除率为44.59%。清除DPPH自由基的试验结果表明,当浓度增加到8mg/mL时,PVG-1的清除率达到61.96%,PVG的清除率达到45.09%。在PVG浓度为6mg/mL时,对O2-·的清除率达到最大,为56.98%,在PVG-1浓度为5mg/mL时,对O2-·的清除率达到最大,为68.36%。当PVG浓度为7 mg/mL时,LPO清除率为46.78%,在PVG-1浓度为7 mg/mL时,LPO清除率为62.56%。可见翡翠贻贝糖胺聚糖有很好的清除自由基效果,且抗氧化效果有明显的量效关系。研究了PVG-1对高脂血症小鼠体内抗氧化酶活力的影响。检测了小鼠血清和肝脏总抗氧化能力（T-AOC）,小鼠血清和肝脏、脑中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果表明,PVG-1中、高剂量组能提高模型对照组小鼠血清和肝脏T-AOC含量（P﹤0.05或P﹤0.01）,PVG-1中、高剂量组能显著降低高脂血症小鼠血清、肝脏和脑中MDA（P﹤0.01）含量,提高血清GSH-Px（P﹤0.05或P﹤0.01）、CAT（P﹤0.01）、SOD（P﹤0.01）活力;肝脏GSH-Px（P﹤0.01）、CAT（P﹤0.05或P﹤0.01）、SOD活力（P﹤0.01）;脑中GSH-Px（P﹤0.01）、CAT（P<0.01）、SOD（P<0.05或P<0.01）活力。提示PVG-1能显著提高机体内源性抗氧化酶活性,降低体内脂质过氧化水平,起到拮抗动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）的作用。

全文目录


摘要  6-8Abstract  8-151 绪论  15-27  1.1 研究背景  15  1.2 多糖研究现状  15-16    1.2.1 贝类多糖的研究概况  16    1.2.2 贝类多糖的来源  16  1.3 多糖提取方法的研究进展  16-18    1.3.1 水溶液提取法  16-17    1.3.2 碱提取法  17    1.3.3 酶提取法  17    1.3.4 超声波提取法  17-18  1.4 多糖纯化方法的研究进展  18-19  1.5 多糖含量及其纯度鉴定  19-20    1.5.1 多糖含量的测定  19    1.5.2 多糖纯度的鉴定  19    1.5.3 多糖相对分子量的测定  19-20  1.6 多糖的生物学活性  20-26    1.6.1 多糖的抗肿瘤与免疫调节作用  20    1.6.2 抗病毒作用  20-21    1.6.3 抗辐射作用  21    1.6.4 降血脂作用  21-24    1.6.5 抗氧化作用  24-25    1.6.6 生物体的氧化-抗氧化作用及其与心血管疾病的关系  25-26  1.7 本课题的立题背景及目的意义  26  1.8 主要研究内容  26-272 翡翠贻贝糖胺聚糖的纯化及理化性质研究  27-40  2.1 前言  27-28  2.2 材料与仪器  28-29    2.2.1 实验材料  28    2.2.2 主要实验仪器与设备  28-29  2.3 试验方法  29-35    2.3.1 翡翠贻贝糖胺聚糖粗品和精制品的制备  29    2.3.2 DEAE-52 纤维素柱层析  29    2.3.3 Sephadex G-200 凝胶柱层析装柱与纯化条件  29-30    2.3.4 翡翠贻贝糖胺聚糖的成分含量的测定  30-34    2.3.5 高效液相色谱法测定翡翠贻贝糖胺聚糖的纯度及相对分子质量  34-35    2.3.6 翡翠贻贝糖胺聚糖两个极分的红外光谱检测  35  2.4 结果与分析  35-39    2.4.1 翡翠贻贝糖胺聚糖DEAE-52 纤维素离子交换柱层析纯化结果  35-36    2.4.2 Sephadex G-200 柱层析纯化结果  36-37    2.4.3 翡翠贻贝糖胺聚糖粗品、精制品及纯化品的组成分析  37    2.4.4 翡翠贻贝糖胺聚糖柱层析后各级分的纯度及相对分子质量  37-38    2.4.5 翡翠贻贝糖胺聚糖柱层析后各组分红外光谱分析  38-39  2.5 讨论  39-40  2.6 小结  403 翡翠贻贝糖胺聚糖降血脂作用的研究  40-54  3.1 引言  40-41  3.2 材料与仪器  41-42    3.2.1 实验材料  41    3.2.2 主要仪器  41-42  3.3 试验方法  42-43    3.3.1 动物的选择及饲料  42    3.3.2 动物分组与处理  42-43    3.3.3 脏器指数  43    3.3.4 血清中脂质含量测定  43    3.3.5 血脂相关指数  43    3.3.6 肝脏中脂质含量测定  43  3.4 统计学处理  43  3.5 结果与分析  43-51    3.5.1 高血脂症模型的建立  43-44    3.5.2 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠各体重的影响  44    3.5.3 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠各脏器指数的影响  44-45    3.5.4 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠血清TC 的影响  45-46    3.5.5 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠血清TG 的影响  46    3.5.6 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠血清HDL-C 的影响  46-47    3.5.7 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠血清LDL-C 的影响  47    3.5.8 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠血清动脉粥样硬化指数的影响  47-48    3.5.9 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠肝脏脂质水平的影晌  48-49    3.5.10 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠血清NO 影响  49    3.5.11 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠血清LCAT 活性的影响  49-50    3.5.12 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠脂蛋白脂酶活性的影响  50    3.5.13 翡翠贻贝糖胺聚糖对小鼠肝脂酶活性的影响  50-51  3.6 讨论  51-53  3.7 小结  53-544 翡翠贻贝糖胺聚糖降血脂机理的初探-抗氧化作用的研究  54-65  4.1 引言  54  4.2 材料与仪器  54-55    4.2.1 实验材料  54-55    4.2.2 主要仪器设备  55  4.3 试验方法  55-57    4.3.1 动物的选择及饲料  55    4.3.2 动物分组及处理  55    4.3.3 体外抗氧化作用检测  55-56    4.3.4 体内检测方法和指标  56-57  4.4 统计学处理  57  4.5 结果与分析  57-63    4.5.1 体外抗氧化作用测定结果  57-60    4.5.2 体内抗氧化作用测定结果  60-63  4.6 讨论  63-64  4.7 本章小结  64-655 结论与展望  65-68  5.1 本文的主要结论  65-66  5.2 本课题尚需解决的问题  66-68参考文献  68-76致谢  76-77导师简介  77作者简介  77

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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