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RNAi沉默Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影响

作　者: 刘波
导　师: 张恒术
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB) 小分子RNA干扰(RNAi) Smad3基因 TGF-β/Smads RNAi 细胞增殖 细胞凋亡 FN ColⅠ
分类号: R622
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


第一部分SiRNA-Smad3对人瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3基因表达的影响目的:探讨SiRNA-Smad3对人瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3基因表达的影响。方法:采用RNAi) 的学位论文">小分子RNA干扰(RNAi)技术,以阳离子脂质体为载体,将3对化学合成的SiRNA-Smad3(Y1、Y2、Y3)分别转染体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB),同时以未转染SiRNA-Smad3的KFB为对照,干扰Smad3的表达以阻碍内源性TGF-β/Smads信号的转导;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和Western Blot检验SiRNA-Smad3干扰Smad3表达的效果;采用免疫荧光化学法检测SiRNA-Smad3干扰前后KFB中Smad3表达位置的变化情况。结果:RNAi技术可有效干扰KFB中Smad3mRNA和蛋白的表达,用RT-PCR方法测定Y1组Smad3 mRNA的表达最弱, Western Blot检验结果与RT-PCR方法一致;Smad3的干扰导致Smad3在细胞质中表达降低,细胞核内几乎没有表达。结论:SiRNA-Smad3作用于人瘢痕疙瘩成纤维细胞后能特异性地抑制Smad3的mRNA和蛋白的表达,并导致Smad3在细胞质中表达降低,细胞核内几乎没有表达。第二部分SiRNA-Smad3沉默Smad3对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的影响目的:研究SiRNA-Smad3沉默Smad3后对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)增殖及凋亡的调控作用。方法:用脂质体法将SiRNA-Smad3转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测阻碍内源性TGF-β/Smads信号转导下KFB的生长情况;采用流式细胞术检测上述条件下细胞周期及凋亡情况。结果:内源性TGF-β/Smads信号转导受阻不但抑制KFB的生长,并且诱导细胞凋亡。结论:TGF-β/Smads在一定浓度范围内可调控KFB的生长和凋亡。第三部分SiRNA-Smad3沉默Smad3对人瘢痕疙瘩成纤维细胞FN表达的影响目的:研究TGF-β/Smads对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)中表达FN的调控作用。方法:用脂质体法将SiRNA-Smad3转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用RT-PCR、Western Blot、免疫组化法检测阻碍内源性TGF-β/Smads信号转导条件下KFB中FN的表达情况。结果:内源性TGF-β/Smads信号转导受阻导致KFB中FN表达减弱。结论:Smad3可以介导TGF-β1信号抑制FN在KFB中的表达。第四部分SiRNA-Smad3沉默Smad3对人瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响目的:研究TGF-β/Smads对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)中ColⅠ表达的调控作用。方法:用脂质体法将SiRNA-Smad3转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用RT-PCR、Western Blot、免疫荧光法检测阻碍内源性TGF-β/Smads信号转导条件下KFB中ColⅠ的表达情况。结果:内源性TGF-β/Smads信号转导受阻导致KFB中ColⅠ表达减弱。结论:Smad3可以介导TGF-β1信号抑制KFB中ColⅠ的表达。

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 整形外科学（修复外科学） > 整形手术学
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