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重组人促红细胞生成素对高糖作用下体外培养视网膜神经细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响

作　者: 陈召利
导　师: 孟岩
学　校: 青岛大学
专　业: 眼科学
关键词: 重组人促红细胞生成素 视网膜神经细胞 细胞凋亡 Caspase-3蛋白
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 19次
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内容摘要


目的：研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)对高糖作用下体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。方法：将出生1-3天大鼠视网膜通过0.125%胰蛋白酶消化制成单细胞悬液,建立一种稳定、可靠的体外培养视网膜神经细胞的方法,并采用免疫细胞化学技术对视网膜神经细胞进行鉴定。用台盼蓝染色观察不同浓度葡萄糖对视网膜神经细胞形态、生长状态及存活数的影响。将体外混合培养3天的原代大鼠视网膜神经细胞随机分为对照组、高糖培养组和不同浓度rhEPO干预组,rhEPO干预组分别在高糖培养液中加入终浓度为5、10、20、40U/ml rhEPO。培养48h后,MTT法检测评价rhEPO干预对高糖损伤视网膜神经细胞的活力影响,并通过免疫细胞化学方法半定量检测不同浓度rhEPO干预高糖损伤神经细胞caspase-3蛋白的表达水平。结果：体外培养的视网膜神经细胞免疫细胞化学染色显示,所培养细胞大部分抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体反应阳性,神经细胞纯度达到90%以上。视网膜神经细胞在高浓度葡萄糖条件下活性下降并出现大量凋亡细胞,并最终选取30mmol／L葡萄糖干预48小时制备神经细胞高糖模型。应用外源性rhEPO干预对神经细胞的高糖损伤具有保护作用,加入5～40U/ml rhEPO干预后均可有效抑制caspase-3蛋白的表达(P<0.01),并且具有一定浓度依赖性。结论：rhEPO干预可以抑制神经细胞高糖损伤导致的细胞凋亡,而且其神经保护作用具有一定浓度依赖性,抑制细胞凋亡因子caspase-3的表达可能是其保护作用机制之一

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中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 视网膜及视神经疾病 > 视网膜疾病
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