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PTD4-Apoptin对不同分化程度胃癌细胞系的抑制效应研究

作　者: 李凌君
导　师: 孙军
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: PTD4-Apoptin 胃癌细胞系分化程度细胞凋亡
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 4次
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内容摘要

目的：本研究以三种不同分化程度的人源胃癌细胞系MKN45（低分化）、SGC7901（中低分化）、MKN28（高分化）为肿瘤模型，观察PTD4-Apoptin融合蛋白对胃癌细胞的生长抑制效应。同时比较三种人源胃癌细胞系对PTD4-Apopitn蛋白敏感性的差异，初步探讨敏感性较差的胃癌细胞系SGC7901、MKN28耐受药物的可能机制。方法：体外研究以人脐静脉内皮细胞系HUVEC为阴性对照，MTT比色法检测PTD4-Apoptin对胃癌细胞的增殖抑制作用， Annexin-V-FITC/PI双染法检测PTD4-Apoptin诱导胃癌细胞凋亡的效应。体内抑瘤效应研究通过裸鼠皮下接种药物敏感性较高的胃癌细胞系MKN45细胞构建裸鼠皮下胃癌移植瘤模型，每天肿瘤表面皮肤涂抹给药，每天观察肿瘤大小，绘制肿瘤体积——时间生长曲线。连续给药28天后，称量瘤重大小，研究PTD4-apoptin蛋白对胃癌的抑瘤效应。脂质体法对胃癌细胞系进行GFP-LC3质粒转染，荧光显微镜观察LC3的细胞定位，研究细胞自噬水平。结果：在所给的药物浓度范围内，低分化的MKN45细胞增殖抑制率较高，随蛋白浓度增加增殖抑制率无明显变化；中低分化的SGC7901细胞增值抑制率较低，呈浓度依赖性；高分化的MKN28细胞增值率最低，呈浓度依赖性。三种胃癌细胞系的凋亡率亦呈现相似规律，低分化的MKN45细胞凋亡率最高达71.02%，中低分化的SGC7901细胞凋亡率次之为23.35%，高分化的MKN28细胞凋亡率最低为9.94%。MKN45细胞的裸鼠体内实验结果显示，与阴性对照组相比，PTD4-Apoptin组在肿瘤生长曲线、肿瘤大小重量上均存在统计学差异。胃癌细胞转染GFP-LC3，荧光显微镜观察，可见经PTD4-Apoptin处理后，MKN45细胞中GFP-LC3主要均匀分布于胞质中，LC3表现为LC3-I型，未观察到明显自噬现象，与对照组无差异；SGC7901细胞中GFP-LC3呈斑点状聚集，LC3表现为LC3-II型，自噬小体数量明显增多，部分细胞可见狼斑，自噬水平增强。结论：PTD4-Apoptin融合蛋白对三种分化程度不同的胃癌细胞系具有生长抑制作用。三种分化程度不同的胃癌细胞系对PTD4-Apoptin蛋白敏感性不同，中低分化的SGC7901细胞、高分化的MKN28细胞敏感性较低，耐受低浓度PTD4-Apoptin的生长抑制作用。细胞自噬可能是造成SGC7901细胞对PTD4-Apoptin低敏感性的一个重要因素。

全文目录

主要缩写词中英文对照  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料和方法  12-20
实验结果  20-34
讨论  34-37
结论  37-38
参考文献  38-42
综述  42-53
  参考文献  50-53
致谢  53

PTD4-Apoptin对不同分化程度胃癌细胞系的抑制效应研究

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