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重楼总皂苷抗肿瘤机制研究

作　者: 李涛
导　师: 何建平
学　校: 陕西师范大学
专　业: 生理学
关键词: 重楼总皂苷骨肉瘤S180 细胞凋亡
分类号: R73-36
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

重楼(Rhizoma Paridis)属百合科(liliaceae),又名蚤休,药用部分为重楼属植物的干燥根茎部,形状呈团块状圆柱形。现代药理研究表明,重楼具有止血消痛,消炎、控制肿瘤、调节免疫等功能。现已从该属植物中分离鉴定了50余种化合物,主要的有效成分为重楼总皂苷(Rhizoma Paridis total saponin, RPTS)。有关重楼抗癌研究,已有很多报道,如胃癌、乳腺癌、食道癌等,但对骨肉瘤的研究甚少。目前对RPTS抗肿瘤机制的研究还处于初期阶段,大多是就单一的某方面进行研究和阐述,虽然得出了一些重要的研究成果,但重楼抗肿瘤机制是一个综合相关联的过程。因此,本实验以移植骨肉瘤S180细胞的昆明系小白鼠为载体,研究滇重楼总皂苷抗肿瘤作用。通过RPTS对载体肿瘤的抑制作用和延长载体存活时间,说明RPTS抗肿瘤作用；用HE染色技术对重楼不同剂量组处理后的载体肿瘤组织进行染色,观察其抗肿瘤效应；运用免疫组化技术,分析不同重楼总皂苷剂量组对相关促癌基因、抑癌基因和癌变性因子表达的影响,阐述重楼总皂苷的抗癌机制。实验结果显示如下：1. RPTS对S180小鼠肿瘤有明显抑制作用,不同剂量(0.075g/kg、0.15g/kg、0.3g/kg)总皂苷小鼠灌胃,抑制肿瘤率分别为38%、41%及42%,CTX组(0.02g/kg)为56.5%,与对照组(灌胃蒸馏水)相比均具有显著性差异(P<0.01)；RPTS能显著延长移植瘤小鼠存活时间(生命延长率),具有明显的量效关系,三种剂量的生命延长率分别为34%、44%和55%,存活天数与对照组有显著性差异(P<0.01)。2.组织学研究表明,CTX组和RPTS中、高剂量组能有效的减少移植瘤细胞的数目,与模型对照组相比有显著性差异(P<0.01),且各组移植瘤细胞结构都出现明显染色质边集化、降解和“出泡”等现象,随RPTS剂量升高此结构变化越明显。3.运用免疫组化实验对荷瘤S180小鼠癌细胞P53、VEGF、MDM2和NF-Kb/P65四个基因在不同处理条件(CTX组、RPTS低剂量组、RPTS中剂量组、RPTS高剂量组)下的阳性表达率进行测定和分析。结果显示,抑癌基因P53在五种不同处理条件下的阳性表达率,对照组最少,CTX组最大,RPTS低、中和高剂量组阳性表达率逐渐增大,且各组与模型对照组比较,除RPTS低剂量组没有显著性差异,CTX组、RPTS中、高剂量组均具有显著性差异(P<0.01)；促癌基因MDM2阳性表达率在五种不同处理条件下,对照组表达量最大,CTX组最小,RPTS低、中和高剂量组随剂量加大表达量明显降低,与模型对照组比较,CTX组有极显著性差异(P<0.01),RPTS高剂量组有显著性差异(P<0.05),低、中剂量组没有显著性差异；VEGF阳性表达率在五种不同处理情况下,对照组最大,CTX组最小,RPTS低、中和高剂量组随剂量加大表达逐渐减小,与模型对照组比较,CTX组有极显著性差异(P<0.01),RPTS中、高剂量组均具有显著性差异(P<0.05、P<0.01),RPTS低剂量组没有显著性差异；核转录因子NF-Kb/P65,在五种不同的处理情况下,对照组中的阳性率表达最大,CTX组最小,RPTS低、中和高剂量组随着剂量的加大,阳性表达率也逐渐变小,与模型对照组比较,除RPTS低剂量组外,其他各组均表现出显著差异(P<0.01)。结论：RPTS对荷瘤S180小鼠肿瘤的生长具有显著地抑制作用,能显著延长移植瘤小鼠的存活时间；RPTS中、高剂量组能显著性地降低移植瘤细胞数目和促进凋亡结构的发生；RPTS通过下调VEGF、MDM2和NF-Kb/P65和上调P53基因的表达抑制肿瘤细胞的增殖和生长,并促进肿瘤细胞的凋亡。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-12
第一部分文献综述  12-22
  1.1 肿瘤研究进展  12-15
    1.1.1 对肿瘤的认知  12
    1.1.2 肿瘤目前发生和发展情况  12
    1.1.3 肿瘤的形成和发病机理  12-14
    1.1.4 肿瘤治疗  14-15
  1.2 重楼总皂苷研究进展  15-17
    1.2.1 重楼概述  15
    1.2.2 药用重楼活性成分  15-16
    1.2.3 皂苷类化合物抗癌症效果和抗癌机制研究  16-17
  1.3 细胞程序化死亡理论和基因靶点调控  17-22
    1.3.1 细胞凋亡概念和机理  17-18
    1.3.2 细胞凋亡的检测方法  18
    1.3.3 肿瘤基因调控  18-22
第二部分重楼总皂苷对荷瘤S180小鼠的抑制作用  22-36
  2.1 材料与仪器  22-23
    2.1.1 实验材料  22
    2.1.2 药品和试剂  22-23
    2.1.3 主要仪器  23
    2.1.4 实验动物  23
  2.2 S180骨肉瘤细胞培养  23-24
    2.2.1 S180细胞株和药品  23-24
    2.2.2 S180细胞株的培养  24
  2.3 方法  24-25
    2.3.1 重楼总皂苷对移植S180骨肉瘤小鼠肿瘤的抑制作用  24-25
    2.3.2 移植S180骨肉瘤小鼠存活期  25
    2.3.3 荷瘤S180小鼠移植瘤组织病理学观察  25
    2.3.4 数据统计分析  25
  2.4 结果  25-29
    2.4.1 重楼总皂苷对移植荷瘤S180小鼠肿瘤的抑制作用  25-27
    2.4.2 重楼总皂苷对移植荷瘤S180小鼠存活时间的影响  27-28
    2.4.3 移植瘤组织病理学变化  28-29
  2.5 讨论  29-32
    2.5.1 重楼总皂苷抑制移植瘤的作用  29-30
    2.5.2 重楼总皂苷延长移植瘤小鼠生存期的作用  30
    2.5.3 移植瘤组织病理结构变化  30-32
  图版  32-36
第三部分重楼总皂苷对荷瘤S180肿瘤细胞P53、VEGF、MDM2和NF-K b/P65表达量的影响  36-52
  3.1 材料与仪器  36-37
    3.1.1 实验材料  36
    3.1.2 主要试剂  36
    3.1.3 主要仪器  36-37
    3.1.4 试剂配制  37
  3.2 方法  37-39
    3.2.1 免疫组化法测定P53、VEGF、MDM2和NF-Kb/P65基因表达量变化  37
    3.2.2 免疫组化步骤  37-39
    3.2.3 数据统计分析  39
  3.3 结果  39-41
    3.3.1 重楼总皂苷对移植瘤P53表达影响  39
    3.3.2 重楼总皂苷对移植瘤MDM2表达影响  39-40
    3.3.3 重楼总皂苷对移植瘤VEGF表达影响  40-41
    3.3.4 重楼总皂苷对移植瘤NF-K b/P65表达影响  41
  3.4 讨论  41-50
  3.5 结论  50-52
参考文献  52-58
致谢  58-60
攻读硕士研究生期间的研究成果  60

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