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目的:肝癌是临床上常见的恶性肿瘤,有“癌中之王”之称,目前肝癌的治疗仍以手术及化疗为主,对于术后化疗或失去手术机会而接受化疗的患者来说,具有肝肾毒性等不良反应的化疗药物其远期疗效并不理想,为提高患者生存质量,延长生存期,更需要有效且低毒的药物。近些年来中药的抗癌作用逐渐为人们所认识,榄香烯是我国自主研发的二类非细胞毒性的广谱抗肿瘤药物,目前被广泛应用于多种肿瘤的治疗,其抑瘤作用机制也被不断的深入探讨,本实验将榄香烯与传统化疗药物5-氟尿嘧啶(fluorouracil, 5-FU)分别及联合作用于H22荷瘤小鼠,观察其抑瘤作用并探讨可能的机制,以期为中药抗肿瘤的临床治疗提供更多依据。方法:选用6~8周,体重18~22g的Balb/C小鼠35只,以剪耳方法作标记并随机等分为5组,每只小鼠左前腋窝下皮下注射浓度为4×10~7个/ml的H22肝癌细胞悬液0.1ml造实体瘤模型,以出现皮丘为接种成功,接种24小时后,5组小鼠分别以榄香烯高剂量(100mg/kg)、榄香烯低剂量(50mg/kg)、5-FU (20mg/kg)、榄香烯低剂量(50mg/kg)联合5-FU (20mg/kg)及生理盐水(0.2ml/只)以腹腔注射的方式每天1次进行治疗,治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,作为评测药物毒性的指标,测量移植瘤大小并以体积计算抑制率,治疗10天后以颈椎脱臼法处死小鼠,无菌条件下剥取移植瘤,拍照,10%福尔马林溶液固定,制作瘤组织的石蜡切片,HE染色法观察各切片中瘤组织的差异,以盐水组为对照组,采用免疫组化法检测榄香烯高剂量组对Bcl-2家族促细胞凋亡蛋白N表达的影响。结果:1.荷瘤小鼠经治疗第3天,5-FU组及联合组小鼠瘤体积较对照组减小即有统计学意义,治疗5天后,各用药组瘤体积较对照组均有减小,差异有统计学意义(P<0.05),联合组优于单独用药组;治疗10天后,各组剥离的移植瘤大小可直接观察到,以对照组平均瘤体积及用药组平均瘤体积的差异计算抑制率,榄香烯组低剂量组及高剂量组对瘤体积的抑制率分别为10.2%和26.7%,5-FU组为52.2%,而联合用药组则达到61.0%。2.对小鼠体重影响,无论是与对照组比较还是与小鼠治疗前比较,联合组及5-FU组小鼠体重均明显下降,榄香烯各组小鼠体重较对照组亦有下降,而因瘤体积不断增大,与治疗前相比体重增加。与对照组相比,计算各组小鼠体重下降率,榄香烯组为0.6%~6.2%,5-FU组及联合组分别为12.6%和13.0%;与治疗前相比,5-FU组及联合组小鼠体重下降率分别为13.1%和21.0%。3.以小鼠饮食、活动及毛发色泽观察对象来评价小鼠生存质量,可发现随着治疗时间的延长,榄香烯组的小鼠生存质量和生存状态均高于5-FU及联合组。4.显微镜下观察各组瘤组织的HE切片,相对于对照组的细胞核深染、排列紧致,可见各用药组对瘤组织不同程度的破坏,尤其是榄香烯高剂量组,可见核淡染、细胞肿胀、固缩或者散落成碎片。5. Bcl-2家族促细胞凋亡蛋白N阳性反应为棕黄色颗粒,定位于胞浆,显微镜下随机选取10个高倍视野,计数约500个细胞,榄香烯高剂量组阳性细胞数比例为17.2%,与对照组比较其表达具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.榄香烯和5-FU均能有效地抑制H22肿瘤的生长。2.榄香烯可作为化疗药5-FU的辅助药物达到治疗肝癌的目的。3.榄香烯能够诱导Bcl-2家族促细胞凋亡蛋白N的表达,这可能是其抑制肝癌的新途径。
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