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大承气汤对多器官功能障碍综合征大鼠小肠平滑肌细胞Bcl-2和Bax表达的影响

作　者: 卫明明
导　师: 齐清会
学　校: 大连医科大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 多器官功能障碍综合征 平滑肌细胞 凋亡 Bcl-2 Bax 大承气汤
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景:多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)指严重创伤(包括休克、重型胰腺炎等)、严重感染、大面积烧伤、外科大手术和病理产科等原发病发生后,在全身炎症反应综合征(systemic inflammation response syndrome,SIRS)的基础上,同时或序贯发生两个或两个以上脏器功能障碍以致衰竭的临床综合征,是目前腹部外科患者死亡的重要原因。胃肠道作为细菌的储菌库,被认为是促发SIRS和MODS的始动器官与靶部位。MODS可引起胃肠运动功能受损,从而导致细菌移位,肠屏障功能受损。胃肠功能状态被认为是判断MODS患者预后的一项重要指标。促进胃肠运动功能的恢复是有效地阻断MODS向多器官衰竭(multiple organ failure,MOF)发展的有效手段。胃肠内神经—ICC—平滑肌细胞网络是胃肠运动的基本单位。细胞凋亡是个体发育过程中由一系列基因控制的细胞主动死亡过程。平滑肌细胞是胃肠运动的执行者,其结构和功能的正常对于胃肠运动有着重要意义。在平滑肌细胞中,原癌基因Bcl-2蛋白家族是重要的细胞凋亡调节因子,在细胞凋亡中相互联系,相互作用调控细胞凋亡。Bcl-2(B cell lymphoma/leukemia 2)蛋白家族包含抑制和促进细胞凋亡两类功能相反的基因,这两种蛋白的代表分别是Bcl-2和Bax(Bcl-2 associated X protein)。国内医务工作者运用中医药下法的代表方剂大承气汤(Dachengqi Decoction DCQD)对MODS进行中西医结合防治,取得较好效果,显示出中医药在MODS防治中的独特优势。近代研究表明,中医药可从多环节、多靶点地发挥作用,能更好的从整体水平对MODS进行干预、控制。因此深入研究MODS发病机理和大承气汤的治疗机制,对MODS的防治具有重要的临床意义。目的:本实验以细菌性腹膜炎致MODS大鼠模型为研究对象,观察MODS大鼠模型小肠肌层中的Bcl-2、Bax的分布和平滑肌细胞结构的改变,以及DCQD对MODS大鼠小肠肌层中Bcl-2和Bax的影响。探讨MODS状态下胃肠运动障碍的发生机制和大承气汤防治MODS的机理。方法:健康成年清洁级Wistar大鼠100只,体重250g左右,雌雄各半,随机分为对照组(20只)、MODS模型组(40只)和MODS+DCQD治疗组(40只)。对照组动物每只腹腔注射1ml生理盐水。MODS模型组和MODS+ DCQD治疗组动物每只腹腔注射1ml E.coloi.混悬液,建立细菌性腹膜炎所致的MODS模型。MODS+DCQD治疗组于造模前2天即给予DCQD灌胃,每次1ml/100g,2次/日。造模24小时后无菌剖腹取存活大鼠的上段小肠组织。部分小肠置于含2.5%戊二醛固定液的培养皿中,将组织切成1mm×2mm小块,经固定,脱水,浸透,包埋,制备半薄切片,光镜定位下制备超薄切片,最后用透射电镜观察平滑肌细胞形态变化,采集图像。其它小肠用甲醛固定后,石蜡包埋,用免疫组化(Strept Actividin-Biotin- Complex,SABC法)染色Bcl-2及Bax,然后固定封片。观察各组小肠平滑肌细胞中Bcl-2和Bax的表达及分布情况,采集图像,统计分析。结果:大体标本和对照组相比,MODS组大鼠胃肠极度扩张,胃肠梗阻征象明显。MODS+DCQD治疗组胃肠扩张、梗阻较MODS组明显减轻。透射电镜观察:MODS组平滑肌细胞核皱缩,胞浆内细胞器数量明显减少,结构出现异常,超微结构受损明显,出现凋亡征象。较之MODS组,DCQD治疗组平滑肌细胞核形态基本正常,胞浆内细胞器数量较多,形态结构较为清楚,超微结构较MODS组损伤明显减轻。免疫组织化学检测各组大鼠小肠平滑肌细胞胞浆内均可见Bcl-2和Bax表达,其免疫反应沉淀物为棕黄色,呈颗粒状或匀质状。对照组Bcl-2和Bax的免疫反应沉淀物在纵肌层和环肌层平滑肌细胞中分布均匀,Bax的较Bcl-2阳性细胞表达稍多。MODS组Bcl-2较对照组表达强度无明显差异(p>0.05),而Bax较对照组表达明显增多(p<0.05)。同组标本Bax的表达较Bcl-2强烈。MODS+DCQD治疗组Bcl-2的表达强度均比对照组、MODS组明显增多(p<0.05),而Bax的表达强度较MODS组明显减少(p<0.05),与对照组相比无明显差异(p>0.05)。同组标本Bcl-2的表达较Bax强烈。结论:1细菌性腹膜炎所致MODS组大鼠胃肠极度扩张,梗阻征象明显;大承气汤能够显著改善其胃肠梗阻症状。2 MODS时大鼠小肠平滑肌细胞结构受到破坏,发生凋亡;DCQD的防治可减轻MODS时平滑肌细胞结构受到的损伤。3 MODS时大鼠小肠平滑肌细胞中的促凋亡基因Bax表达增多,使细胞过度凋亡;DCQD的防治可增加MODS状态下平滑肌细胞抑凋亡基因Bcl-2的表达,减少Bax的表达,下调细胞凋亡水平,保护胃肠平滑肌细胞。

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摘要  6-8Abstract  8-11前言  11-12材料和方法  12-14结果  14-16讨论  16-22结论  22-23参考文献  23-25综述  25-32  参考文献  30-32附录  32-35缩略语  35-36致谢  36

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