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皇家外科学院大鼠视网膜色素变性发病过程中周期素依赖性蛋白激酶5与细胞凋亡的关系

作　者: 任英华
导　师: 盛迅伦
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 视网膜炎 色素性/病理生理学 细胞周期蛋白依赖激酶5 细胞凋亡 动物实验
分类号: R774.13
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的观察周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)和p25在不同病程皇家外科学院（RCS）大鼠视网膜色素变性（RP）模型视网膜中的表达及与细胞凋亡的关系，探讨Cdk5/p25介导的光感受器细胞凋亡在RP的发病过程中的作用。方法取RCS RP大鼠（RCS大鼠）及正常对照RCS-rdy+大鼠17、25、35、60日龄组视网膜，光学显微镜下观察视网膜结构，测量视网膜外核层厚度；利用免疫组织化学染色法观察各日龄组大鼠视网膜中Cdk5、p25和cleave-caspase3的表达及变化；采用Western blot法测定视网膜中cleave-caspase3的蛋白质表达水平；原位末端标记（TUNEL）法检测视网膜中凋亡发生的情况，并对凋亡细胞平均吸光度[A，旧称光密度（OD）]值进行统计分析。采用SPSS17.0统计软件处理数据。结果随着出生日龄的增加，RCS大鼠视网膜厚度较正常对照组RCS-rdy+相应日龄组大鼠视网膜厚度变薄，主要表现为视网膜视杆、视锥细胞层和外核层明显变薄。在RCS大鼠17、25、35日龄组，Cdk5，p25和cleave-caspase3在视网膜中的表达呈现为逐渐增强的趋势，60日龄组表达下降；对照组RCS-rdy+大鼠视网膜中表达差异无统计学意义。Western blot法检测结果显示，随着出生日龄的增加，RCS大鼠视网膜cleave-caspase3的表达明显增加，以35日龄组增加最为明显，而RCS-rdy+大鼠视网膜cleave-caspase3的表达没有明显的变化。TUNEL标记法检测结果显示，各日龄组视网膜中凋亡细胞主要出现在视网膜外核层中，在RCS大鼠17、25、35日龄组，各组凋亡细胞呈逐渐增多的趋势，60日龄组凋亡细胞显著下降；RCS-rdy+各日龄组凋亡细胞没有明显的变化。多变量偏相关分析结果显示，Cdk5表达与p25表达、Cdk5表达与cleave-caspase3表达、Cdk5表达与凋亡细胞表达、p25表达与cleave-caspase3表达、p25表达与凋亡细胞表达、cleave-caspase3表达与凋亡细胞表达的偏相关系数分别为0.949、0.808、0.959、0.887、0.979、0.852，p值为0.000，两两变量之间均显著相关。结论17、25、35日龄RCS大鼠，随着出生日龄的增加，其视网膜凋亡细胞逐渐增多，而Cdk5、p25和cleave-caspase3的表达逐渐增强。RCS大鼠视网膜中凋亡细胞变化趋势与Cdk5、p25和cleave-caspase3的表达水平基本一致，提示RCS大鼠视网膜中光感受器细胞的凋亡与Cdk5、p25的表达水平升高有关，Cdk5可能参与了RCS大鼠RP的发生与发展。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
前言  12-20
  1.视网膜色素变性  12-13
  2.细胞周期蛋白依赖激酶 5（Cdk5）  13-16
  3.Caspase 家族  16-18
  4.RCS 大鼠  18
  5.当前研究的目的  18-20
材料和方法  20-31
  1.材料  20-24
    1.1 实验动物  20
    1.2 实验动物分组  20
    1.3 主要试剂及仪器  20-24
  2.研究方法  24-31
    2.1 组织蜡块的制作及视网膜蛋白的提取  24-25
    2.2 HE 染色  25-26
    2.3 免疫组织化学染色实验  26-27
    2.4 TUNEL 检测  27-28
    2.5 蛋白免疫印迹法（Western Blot）  28-30
    2.6 统计学方法  30-31
结果  31-39
  1 实验组 RCS 大鼠及对照组 RCS-rdy+大鼠视网膜组织石蜡切片 HE 染色  31-32
  2.免疫组织化学染色  32-36
  3 TUNEL 检测 RCS 大鼠及对照组 RCS-rdy+大鼠视网膜细胞凋亡情况  36-38
  4.Cdk5、p25、cleave-caspase3、TUNEL 表达相关分析  38
  5 Western blot 法检测 cleave-caspase3 在 RCS 大鼠及 RCS-rdy+大鼠日天龄组视网膜中的表达  38-39
讨论  39-44
结论  44-45
参考文献  45-52
文献综述  52-63
  综述参考文献  59-63
致谢  63
攻读学位期间发表的学术论文  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 视网膜及视神经疾病 > 视网膜疾病 > 视网膜变性
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