学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

IL-24基因治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

作　者: 杨善花
导　师: 崔逢德
学　校: 延边大学
专　业: 病原生物学
关键词: 重组质粒 IL-24 黑色素瘤 细胞凋亡
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 62次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：研究重组质粒pEGFP-N1-IL-24基因在小鼠黑色素瘤移植瘤体内的表达及其对黑色素瘤的抑制作用。方法：1.B16细胞培养从液氮罐里取出并复苏B16细胞,接种于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液的培养瓶中进行培养,传代。2.黑色素瘤B16细胞小鼠皮下移植瘤模型的建立待观察C57BL/6小鼠一周后,一般状况良好的情况下,收集对数生长期的B16细胞,在无菌条件下每只以5×10.cells/ml接种于小鼠背部皮下,观察小鼠移植瘤的生长情况。3.IL-24基因治疗黑色素瘤B16细胞小鼠移植瘤的影响将荷瘤鼠随机分为3组,每组6只,在瘤体内注射脂质体包裹的重组质粒pEGFP-N1-IL-24(10μg)为实验组,注射脂质体包裹的空载质粒pEGFP-N1(10μg)、注射PBS(0.2m1)为阴性对照组。每3天注射一次,共注射4次。每次注射药物前先用游标卡尺测量肿瘤的长径(L)和短径(W),计算肿瘤体积,并绘制肿瘤的生长曲线。4.在末次注射药物后7天断颈处死小鼠,剥离肿瘤组织。小部分组织冰冻用于RT-PCR鉴定,剩余部分组织冰冻用于Western蛋白印迹法检测Bax蛋白的表达。5. RT-PCR方法检测移植瘤组织中IL-24mRNA的表达从各组移植瘤组织中提取总RNA,逆转录合成cDNA,与IL-24上下游引物,进行PCR反应,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,并查看目的条带6. Western蛋白印迹法检测移植瘤组织中的Bax蛋白的表达提取各组移植瘤组织中的蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,转膜,封闭,加入抗体与目的蛋白产生反应,显影、定影后,观察目的蛋白的表达水平。结果：1.成功建立了黑色素瘤移植瘤小鼠模型,接种细胞后第12天小鼠皮下肿瘤直径均达5mm,肿瘤移植率达100%；2.肿瘤生长曲线图表明重组质粒pEGFP-N1-IL-24组移植瘤的体积明显小于空载质粒pEGFP-N1组和PBS组,其差异有统计学意义(P<0.05),而空载质粒组和PBS组移植瘤体积则无明显差异(P>0.05)。与空载质粒pEGFP-N1组和PBS组相比,重组质粒pEGFP-Nl-IL-24组移植瘤生长缓慢,而空载质粒pEGFP-N1组和PBS组移植瘤生长曲线几乎平行；3.各组的肿瘤组织中提取了RNA,进行RT-PCR检测,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒pEGFP-N1-IL-24组在611bp处有一阳性条带而空载质粒pEGFP-N1组和PBS组未出现此预期的条带；4.各组移植瘤组织中提取蛋白进行Western蛋白印记法,结果在重组质粒pEGFP-N1-IL-24组上出现了Bax蛋白的表达,而空载质粒pEGFP-N1组和PBS组未出现Bax蛋白的表达。结论：1. IL-24基因在黑色素瘤组织中稳定表达了其蛋白。2. IL-24具有抑制黑色素瘤B16细胞小鼠移植瘤生长的作用。3. IL-24对黑色素瘤组织有促进Bax蛋白分泌的作用。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-9
缩略语表  9-12
第一章 前言  12-14
第二章 实验材料  14-18
  2.1 主要实验材料  14
  2.2 实验主要试剂  14-15
  2.3 实验耗材和仪器  15-16
  2.4 培养基和溶液的配制  16-18
第三章 实验方法  18-26
  3.1 质粒的制备  18
  3.2 B16细胞的培养  18-20
  3.3 移植瘤动物模型的建立  20
  3.4 RT-PCR鉴定IL-24的表达  20-23
  3.5 Western blot检测Bax蛋白的表达  23-25
  3.6 统计学处理  25-26
第四章 实验结果  26-29
  4.1 小鼠移植瘤模型的成功建立  26
  4.2 IL-24基因治疗后对肿瘤生长的影响  26-27
  4.3 IL-24在移植瘤中的表达  27-28
  4.4 Bax蛋白的表达情况  28-29
第五章 讨论  29-32
第六章 结论  32-33
  6.1 IL-24基因在黑色素瘤组织中稳定表达了其蛋白  32
  6.2 IL-24具有抑制黑色素瘤B16细胞小鼠移植瘤生长的作用  32
  6.3 IL-24对黑色素瘤组织有促进Bax蛋白分泌的作用  32-33
参考文献  33-36
致谢  36-37
综述  37-44
  参考文献  42-44

相似论文

  1. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  2. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  3. 醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究,X174
  4. 地克珠利对柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子甘油醛-3-磷酸脱氢酶的影响,S858.31
  5. PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞钙信号的影响及其机理初探,S858.28
  6. β-catenin在猪卵巢组织中的表达以及对猪卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇生成酶的影响,S828
  7. 伏马菌素B1和黄曲霉毒素B1联合诱导Vero细胞凋亡的研究,S856.9
  8. 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
  9. 沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡及BMP通路相关基因表达的影响,S828
  10. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对鸡软骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,S858.31
  11. Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,S865.13
  12. 骨髓间充质干细胞预移植1周对大鼠心肌缺血再灌损伤的修复作用,R542.22
  13. 18氟—氟代脱氧葡萄糖诱导Eca-109食管癌细胞凋亡的初步研究,R735.1
  14. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导仓鼠肾细胞凋亡信号转导机制的研究,S856.9
  15. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导人结肠癌细胞凋亡线粒体信号转导机制的研究,R735.35
  16. 磷脂酶C和D在木聚糖酶诱导的水稻悬浮细胞抗病反应中的作用,S511
  17. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
  18. 榄香烯对人肝癌HepG-2细胞拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ的影响,R735.7
  19. sCD40L对白血病HL-60细胞株生物学行为的影响及机制,R733.7
  20. 常规化疗联合节拍化疗对乳腺癌裸鼠移植瘤的实验研究,R737.9
  21. 凋亡调控因子Survivin、XIAP以及c-Jun、NF-κB在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义,R737.31

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 皮肤肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com