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P4HB在益气除痰法治疗肺癌中的疗效预测作用研究

作　者: 孙玲玲
导　师: 林丽珠
学　校: 广州中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 益气除痰脯氨酸4-羟化酶β亚基细胞凋亡上皮-间质转化血管新生
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 61次
引　用: 2次
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内容摘要

目的：“益气除痰法”是广州中医药大学第一附属医院肿瘤科治疗肺癌的根本大法,“益气除痰方”是治疗肺癌的基本经验方,经国家“十五”攻关项目及“十一五”支撑计划项目验证治疗中晚期肺癌具有稳定瘤体、延长生存期的疗效。脯氨酸4-羟化酶β亚基(prolyl4-hydroxylase beta polypeptide, P4HB)是导师课题组在前期蛋白质组学研究中筛选出的一个经益气除痰方治疗后肺癌组织表达明显下调的内质网分子伴侣蛋白,在肿瘤的发生发展中起重要作用。研究结果提示益气除痰方治疗肺癌的疗效与P4HB相关。本研究拟进一步探讨P4HB在益气除痰法治疗肺癌中的疗效预测作用,并分析其作用机理。方法：首先,回顾性分析广州中医药大学第一附属医院2003.1-2010.9期间收治的初诊的非小细胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)患者的临床资料,采用免疫组化法测定肺癌组织内P4HB表达,采用x2检验分析P4HB表达与病理类型、分期、分化程度、vimentin表达、性别及中医证型等的相关性,结合文献调研,探索P4HB促进肺癌发生发展的作用机理,分析P4HB促进肺癌发生发展可能参与的细胞学事件。其次,采用logistic回归分析等统计学方法分析益气除痰法治疗肺癌稳定瘤体、延长生存期的疗效与P4HB表达的相关性,以探讨P4HB是否是益气除痰法治疗肺癌的疗效预测因子和作用靶点。最后,通过分析益气除痰方对P4HB促进肺癌发生发展参与的细胞学事件的干预作用,探索益气除痰方基于下调P4HB治疗肺癌的作用机理,进一步验证P4HB是否是益气除痰法治疗肺癌的分子靶点。采用MTT测定益气除痰方对A549细胞活力的影响；采用CoC12模拟缺氧微环境诱导A549肺癌细胞上皮间质转化,观察益气除痰方对缺氧诱导细胞形态改变的干预作用；免疫组化法观察益气除痰方对lewis肺癌组织微血管密度的影响。分别采用western blot、RT-PCR、免疫组化等方法观察益气除痰方对P4HB及其相关蛋白表达的影响结果：1.P4HB促进肺癌发生发展的机制P4HB在肺癌中高表达,与分化程度呈负相关,与病理分期、vimentin表达呈正相关,关联系数依次为0.352、0.367、0.377,与病理类型、患者年龄、性别、有无伴发病、发病部位、中医证型、吸烟状态等无明显相关。P4HB在高度恶性肺癌病灶边缘区域及转移灶的细胞核及细胞质中均高表达。P4HB在血管内皮细胞中高表达。研究结果提示P4HB具有促进肺癌侵袭、转移作用。2.P4HB在益气除痰法治疗肺癌中的疗效预测作用性别、是否初治是影响益气除痰法治疗肺癌疾病控制率的独立凶素,益气除痰法对女性、复治、P4HB高表达的肺癌患者具有较好的稳定瘤体的作用；瘤体的稳定可影响患者的生存期。益气除痰法中药作用下,P4HB高表达的生存期较长,但与P4HB低表达组比较差异无统计学意义。3.益气除痰方基于下调P4HB治疗肺癌的作用机理研究益气除痰方含药血清具有诱导A549细胞凋亡及下调P4HB表达的作用,且具有一定的时间一浓度依赖性。益气除痰方抑制A549细胞活力与其下调P4HB二者之间呈正相关(pearson相关系数r=0.670,P<0.01)。益气除痰方含药血清既可上调内质网应激凋亡GADD153信号通路的GADD153蛋白、P53mRNA表达,又可通过下调Bcl-2mRNA表达,上调Bax mRNA表达调控内质网应激凋亡Bcl-2家族信号通路。以上研究结果提示益气除痰方可通过下调P4HB表达激活内质网应激凋亡GADD153、Bcl-2信号通路促进肺癌细胞凋亡。在CoCl2培养A549细胞模拟缺氧微环境状态下,A549呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清组较缺氧组呈间质细胞形态的细胞明显减少。并且益气除痰方含药血清可抑制缺氧诱导的P4HB、vimentin mRNA上调。研究结果提示益气除痰方可抑制缺氧诱导上皮间质转化,并可能与其下调P4HB表达相关。益气除痰方可降低微血管密度,并下调P4HB的表达；提示益气除痰方可抑制血管新生,并可能与其下调P4HB表达相关。结论：P4HB不仅可作为益气除痰法治疗肺癌的疗效预测因子,同时也是益气除痰法治疗肺癌的重要分子靶点。P4HB可能通过维持细胞处于低分化状态、保护细胞生存、促进上皮间质转化及血管新生等促进肺癌的侵袭转移。益气除痰方可能通过下调P4HB表达诱导肺癌细胞凋亡、抑制上皮间质转化及血管新生抑制肺癌的侵袭转移,从而达到稳定瘤体和延长生存期的作用。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-8
目录  8-10
引言  10-12
第一部分文献研究  12-17
  1.1 疗效预测在中医药个体化治疗肿瘤中的意义  12
  1.2 益气除痰法治疗中晚期肺癌的前期研究基础  12-13
  1.3 P4HB与肿瘤发生发展的关系  13-16
    1.3.1 P4HB保护在内质网应激状态下的细胞生存  14
    1.3.2 P4HB与上皮间质转化  14-15
    1.3.3 P4HB与细胞分化  15-16
    1.3.4 P4HB与血管新生  16
  1.4 小结  16-17
第二部分 P4HB促进肺癌发生发展的机制及在益气除痰法治疗肺癌中的疗效预测作用分析  17-26
  1.1 研究方法  17-19
    1.1.1 病例来源  17
    1.1.2 病例选择标准  17-18
    1.1.3 治疗方案及随访指标  18
    1.1.4 肺癌P4HB、vimentin表达测定  18-19
    1.1.5 统计分析  19
  1.2 研究结果  19-24
    1.2.1 一般资料  19
    1.2.2 P4HB在肺癌组织中的表达及其与各临床因素的关系  19-21
    1.2.3 益气除痰法治疗肺癌疗效与P4HB表达的相关性分析  21-24
  1.3 讨论  24-26
    1.3.1 P4HB促进肺癌发生发展的机制  24-25
    1.3.2 益气除痰法治疗肺癌疗效与P4HB表达的相关性分析  25-26
第三部分益气除痰方基于下调P4HB治疗肺癌的机理研究  26-46
  1.1 实验材料  26-30
    1.1.1 实验细胞  26
    1.1.2 实验动物  26
    1.1.3 实验试剂  26-27
    1.1.4 主要仪器  27-28
    1.1.5 试剂配置  28-30
  1.2 研究方法  30-36
    1.2.1 益气除痰方基于下调P4HB诱导肺癌细胞凋亡的研究  30-34
    1.2.2 益气除痰方基于下调P4HB调控肺癌细胞上皮间质转化的研究  34-35
    1.2.3 益气除痰方基于下调P4HB抑制肺癌血管新生的研究  35
    1.2.4 统计分析  35-36
  1.3 研究结果  36-43
    1.3.1 益气除痰方基于下调P4HB诱导肺癌细胞凋亡  36-40
    1.3.2 益气除痰方基于下调P4HB抑制肺癌细胞上皮间质转化  40-41
    1.3.3 益气除痰方基于下调P4HB抑制肺癌血管新生  41-43
  1.4 讨论  43-46
    1.4.1 益气除痰方基于下调P4HB诱导肺癌细胞凋亡  43-44
    1.4.2 益气除痰方基于下调P4HB抑制肺癌细胞上皮间质转化  44
    1.4.3 益气除痰方基于下调P4HB抑制肺癌血管新生  44-46
总结  46-47
  1.1 主要结论  46
  1.2 研究意义及创新之处  46
  1.3 展望  46-47
参考文献  47-50
附录  50-59
  1.1 英汉缩略语名词对照  50-52
  1.2 P4HB免疫组化图片  52-59
在校期间发表论文情况  59-61
致谢  61

P4HB在益气除痰法治疗肺癌中的疗效预测作用研究

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