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子痫前期相关miR-18b功能的研究

作　者: 杨烨
导　师: 任东青; 尹国武; 朱晓明; 苗霞
学　校: 第四军医大学
专　业: 妇产科学
关键词: 子痫前期 miR-18b 细胞凋亡滋养细胞
分类号: R714.245
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

子痫前期（Preeclampsia，PE）是妊娠期特有的疾病，其发病原因比较复杂。现认为其主要病因在于胎盘，其中滋养细胞的凋亡、增殖、分化异常是子痫前期的发病基础，滋养细胞功能障碍导致了胎盘浅着床，致使胎盘缺血缺氧，从而形成子痫或子痫前期。微小RNA在真核细胞中广泛存在，是一类21-25nt的非编码单链RNA。其通过与靶信使RNA（mRNA）3’端的非编码区进行互补，进而在发育、细胞凋亡、增殖、肿瘤的发生中某些激素分泌发挥着极其重要的作用。以往在研究中发现，子痫前期的胎盘组织与正常胎盘组织相比，有34个微小RNA的表达是失衡的，其中miR-18b呈病理性低表达。目前，有关miR-18b与子痫前期相关性的研究，仅见于本实验室miR-18b与雌激素受体α关系的研究，但对滋养细胞的功能影响尚无报道。为了探讨miR-18b对滋养细胞功能的影响，选择滋养细胞肿瘤系（JEG-3）细胞为研究对象。拟采用瞬时转染技术观察miR-18b对JEG-3细胞生长增殖、周期与凋亡、浸润和迁移等细胞功能的改变，以及对细胞凋亡相关基因的调控作用。旨在探讨miR-18b在子痫前期中的功能及其分子机制。目的1.通过研究miR-18b对人滋养细胞肿瘤系JEG-3细胞生物学特性的影响，进一步明确miR-18b在子痫前期发生发展过程中的作用及其功能。2初步阐明miR-18b对JEG-3细胞凋亡的调控机制。方法1.miRNA（microRNA）过表达和抑制技术分别转染人滋养细胞肿瘤细胞系（JEG-3），进行过表达或降调节miR-18b，逆转录-聚合酶链反应技术（Reversetranscriptase polymerase chain reaction,RT-PCR）检测miR-18b在细胞中的表达量。2.在JEG-3细胞中降调节和过表达miR-18b后，采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡的变化。3.Transwell法在JEG-3细胞中降调节和过表达miR-18b后，检测细胞浸润能力的变化；细胞划痕法检测转染后细胞平行迁移能力的影响；MTT法检测转染后细胞增殖能力的影响。4. Real-time PCR分析与凋亡相关Bcl-2、Bax、P53基因的表达。5. Western-blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和P53的表达。结果1.转染miR-18b对JEG-3细胞功能的影响在过表达miR-18b后，RT-PCR结果显示转染后JEG-3细胞中miR-18b的表达受调控后显著地升高（P＜0.05)。但是其细胞周期、凋亡、增殖、迁移等指标均无明显差别（P＞0.05）。在降调节miR-18b后，RT-PCR结果显示转染后JEG-3细胞中miR-18b的表达显著降低（P＜0.05)。细胞凋亡检测结果为降调节miR-18b组与正常组相比,细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05)；MTT检测结果显示，降调节miR-18b后细胞的增殖能力出现了明显下降，具有统计学差异（P＜0.05)；划痕法检测在JEG-3细胞降调节miR-18b组24h后，其细胞迁移能力显著降低（P＜0.05)；而细胞浸润能力和细胞周期均在降调节后无改变（P＞0.05）。2.miR-18b对JEG-3细胞凋亡相关基因表达的调控作用Real-time PCR检测结果表明P53基因表达在miR-18b降调节时，mRNA表达量明显增高（P＜0.05)，Bcl-2和Bax mRNA水平均无明显的变化（P＞0.05）。Western-blot结果显示降调节miR-18b后，可使Bcl-2蛋白表达水平显著降低，而Bax蛋白表达水平明显增高，两者均有统计学差异（P＜0.05)；P53蛋白的表达量有所增加但无统计学差异（P＞0.05）。过表达miR-18b时对Bcl-2和Bax的表达量无明显变化（P＞0.05），P53蛋白水平表达在过表达组也无明显变化（P＞0.05）；结论降调节miR-18b可降低JEG-3细胞的增殖和迁移能力，并促进细胞的凋亡；miR-18b可能通过调控与凋亡相关的基因，如激活P53基因，可下调Bcl-2蛋白表达并上调Bax蛋白表达，从而促进了细胞凋亡，引起抑制细胞增殖和降低迁移能力。以上结果为进一步探索miR-18b的靶基因提供了实验数据，也为研究PE的发病机理提供新的理论依据。

子痫前期相关miR-18b功能的研究

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