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低分子柑橘果胶杀伤结肠癌细胞过程中关键凋亡蛋白的活化

作　者: 徐厚巍
导　师: 刘海鹰
学　校: 广州医学院
专　业: 外科学
关键词: 低分子柑橘果胶半乳糖凝集素-3 结肠肿瘤细胞凋亡 caspase-9 caspase-3
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景大肠癌是目前全球发病率、死亡率最高的恶性肿瘤之一,其发病率有明显的上升趋势,在我国大肠癌的发病率也逐年上升,并且已经成为我们城市人口癌症死亡的第4位。化疗是肿瘤治疗的重要组成部分,在过去的三十年内,化疗使肿瘤治疗的效果得到了很大程度的提高。目前临床上影响肿瘤化疗效果进一步提高存在两个主要障碍,一是癌细胞对化疗药物的的不敏感或是获得性的耐药;二是化疗药物对一些重要的组织和器官存在的非特异性的毒性,限制化疗药物有效剂量的提高。由于化疗导致的系统性毒性和药物耐药是肿瘤化疗成功的主要障碍。而新的分子靶向药物也存在价格昂贵和耐药问题,从食物中提取有效成分抑制肿瘤生长和转移活性并有可能增强化疗药物的研究越来越引起重视。研究发现低分子柑橘果胶(MCP)具有抗肿瘤转移的活性,同时MCP作为一种天然的成分没有明显的毒副作用。我们的前期研究发现MCP不但对于结直肠癌肝转移灶的形成有抑制作用,而且对于原发灶也有一定的限制作用。MCP的抗转移活性已经得到认可,其抗转移的作用靶点和分子机理已证实,但目前对于MCP抑制肿瘤细胞生长的机制仍不清楚,已有报道MCP对黑色素瘤细胞具有一定的杀伤活性,与外源性的凋亡途径有激活有关。因此我们推测MCP对结直肠癌肿瘤细胞也具有一定的杀伤活性。目的:研究低分子果胶(MCP)对结肠癌肿瘤细胞生长的杀伤作用,并初步探讨其分子机制。方法:1、细胞株;人结肠癌细胞株SW116、HCT116、HT-29、SW620、SW480。2、MTT法评价不同浓度MCP处理48小时对上述不同人结肠癌细胞株的体外抑制增殖的作用和明确MCP对上述实体瘤细胞的IC50值。3、显微镜观察不同浓度MCP处理24小时后人结肠癌细胞形态的改变。4、流式细胞仪检测2.5mg/mlMCP对人结肠癌细胞处理24小时后凋亡比例。5、Western blotting检测不同浓度MCP处理抑制作用较强的细胞株48小时后Caspase-8,Caspase-9,Caspase-3,PARP蛋白表达水平的变化情况。结果:1、MCP对结肠癌细胞株SW116、HCT116、HT-29、SW620、SW480均有抑制作用,且呈浓度依赖性,HCT116最敏感。因低分子柑橘果胶的溶解度问题,高浓度无法溶解,故MTT实验无法顺利完成,可几乎完全溶解的浓度5mg/ml。2.显微镜观察浓度为2.5mg/mlMCP对结肠癌细胞株处理24小时后细胞形态学改变,因为MCP即使是低浓度溶解后液面仍较浑浊,所以无法观察到细胞的形态,更无法观察到细胞凋亡的特征。3.采用流式细胞仪检测浓度为2.5mg/ml的MCP作用于大肠癌SW116、HCT116、HT-29、SW620、SW480、细胞24小时后的凋亡细胞比例情况。发现MCP处理后凋亡细胞比例与空白对照组相比有显著提高,统计学分析差异有显著意义(P<0.01)。4.应用western Bloting方法检测浓度为2.5mg/ml、5mg/mlMCP处理HCT116细胞48小时后,观察caspaes-8、caspase-3、caspase-9、PARP酶原变化。两种浓度下caspase-9、caspase-3酶原均有活化,可见裂解后的片段,PARP可见酶原裂解增加, caspase-8未出现明显裂解片段。结论:1、MCP可以诱导结肠癌细胞凋亡,进而抑制其生长增殖;2、MCP诱导细胞凋亡的分子机制可能是活化内源性凋亡途径中关键蛋白caspase-9,进而激活caspase-3裂解PARP诱导细胞凋亡。

全文目录

摘要  3-6
Abstract  6-9
英文缩略词索引  9-10
前言  10-15
材料与方法  15-21
  一、材料  15-16
  二.实验方法  16-21
结果  21-25
讨论  25-29
结论  29-30
创新与不足  30-31
参考文献  31-36
MCP 抗肿瘤活性的研究进展  36-42
  参考文献  40-42
攻读学位期间取得的研究成果和会议学习情况  42-43
致谢  43-44

低分子柑橘果胶杀伤结肠癌细胞过程中关键凋亡蛋白的活化

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