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稳定转染MnSOD基因的PC12细胞系的建立及其抗氧化应激作用

作　者: 张宝
导　师: 周玫
学　校: 第一军医大学
专　业: 生物化学
关键词: MnSOD基因 PC12细胞凋亡过氧化氢
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

目的氧应激是指细胞受到活性氧种所致的细胞毒作用。在中枢神经系统中，许多退行性疾病都涉及到氧应激，而MnSOD在抗氧应激中具有重要的作用。为了研究MnSOD在神经细胞中的抗氧应激作用，由于PC12细胞具有一定的神经元的特性，所以本实验研究选用PC12细胞作为研究对象，将MnSOD基因导入细胞中，使之在细胞内稳定表达，然后观察H₂O₂对基因修饰后PC12细胞的细胞毒性作用变化，揭示MnSOD在H₂O₂对PC12细胞的细胞毒中的作用，为以后研究神经系统疾病打下基础，为防治脑氧应激损伤提供依据。方法通过基因转染稳定表达人正义和反义MnSOD的PC12细胞，用低浓度的H₂O₂攻击各细胞系，采用MTT法、流式细胞仪检测和Hoechest染色方法研究H₂O₂的细胞毒作用。采用RT-PCR的方法检测转染细胞APP的表达情况。结果发现低浓度的H₂O₂（50μM、100μM）对PC12细胞的细胞毒作用是通过诱导其凋亡，流式细胞仪测试可见在G1峰左侧出现一个亚二倍体细胞群峰型。Hoechst 33258染色见细胞核呈浓染致密的颗粒状荧光，而且有核碎裂的征象。转染正义和反义MnSOD的细胞的MnSOD酶活性分别比原细胞提高了1倍和降低约70％；转染正义MnSOD的细胞具有抑制H₂O₂诱发的PC12细胞的调亡作用，而转染反义MnSOD的细胞使之更敏感。RT-PCR的结果显示MnSOD对APP的表达无明显影响。结论 MnSOD具有抑制H₂O₂对PC12细胞的凋亡作用，也表明H₂O₂诱导PC12的凋亡作用可能涉及到损伤细胞的线粒体，导致氧化还原失衡继而诱发细胞凋亡。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-6
前言  6-8
实验一稳定转染hMnSOD基因 PC12细胞系的建立  8-26
  1．材料和方法  8-20
  2．结果  20-24
  3．讨论  24-26
实验二 H_2O_2对PC12细胞的损伤作用  26-36
  1．材料和方法  26-28
  2．结果  28-34
  3．讨论  34-36
实验三 MnSOD过表达对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的影响  36-42
  1．实验方法  36-37
  2．结果  37-40
  3．讨论  40-42
实验四 MnSOD的表达对APP表达的影响  42-47
  1．实验方法  42-44
  2．结果  44
  3．讨论  44-47
参考文献  47-53
[综述] AD病、线粒体和MnSOD  53-61
致谢  61

稳定转染MnSOD基因的PC12细胞系的建立及其抗氧化应激作用

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