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尾气PM_（2.5）的细胞免疫毒性及其作用机制研究

作　者: 郭丽丽
导　师: 原福胜；张志红
学　校: 山西医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 汽车尾气 学龄儿童 免疫功能 PM2.5 淋巴细胞 凋亡 ATP酶 钙稳态
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


第一部分尾气污染对学龄儿童的细胞免疫毒性及凋亡诱导作用目的探讨尾气污染对学龄儿童外周血淋巴细胞的免疫毒性及细胞凋亡的诱导作用,为有效控制交通尾气污染,保障人群健康提供科学依据。方法用质量法测定两路口PM2.5的日平均浓度；采用盐酸萘乙二胺分光光度法测定NOx；采用非色散红外吸收法测定CO；流式细胞仪测定CD3+/CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群、CD4+／CD8+和淋巴细胞早期凋亡和坏死、琼脂糖凝胶电泳测定DNA ladder、western blot测定caspase-3蛋白表达。结果污染区A路口空气中PM2.5日均浓度为0.810 mg／m3,显著高于清洁区B路口(0.323mg／m3),差异有统计学意义(P<0.05)。A路口的CO和NOx浓度分别为5.054、0.106 mg/m3,显著高于B路口(0、0.063 mg/m3),差异有统计学意义(P<0.01)。污染区A学校儿童外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD4+／CD8+百分含量为58.595、30.027、1.407,清洁区B学校为66.572、37.690、1.787。两个地区学龄儿童外周血淋巴细胞CD3+、CD4+百分含量和CD4+／CD8+有显著差别(P<0.05),而CD8+百分含量差别无统计学义；污染区A学校儿童淋巴细胞早期凋亡率和坏死率为4.351,0.884,清洁区B学校为2.099,1.062。两学校学龄儿童早期凋亡率有显著差别(P<0.05),坏死率无明显差别(P>0.05)。CD3+水平与早期凋亡、坏死呈负相关,pearson系数分别为·0.293,-0.248,P值分别为0.001,0.003：CD4+水平与早期凋亡,坏死呈负相关,pearson系数分别为-0.230,-0.224,P值分别为0.006,0.008。污染区DNA ladder阳性率是37.9%,清洁区DNA ladder阳性率为27.9%,污染区略高于清洁区,但没有统计学差异;污染区的Caspase-3/β-actin灰度高于清洁区,也无统计学差异。结论尾气污染对学龄儿童的细胞免疫功能有抑制作用,可能由细胞凋亡引起。第二部分尾气PM2.5对人外周血淋巴细胞免疫毒性及其相关机制目的探讨尾气PM2.5对人外周血淋巴细胞的免疫毒性及其作用机制。方法用MTT、LDH的方法确定尾气PM2.5染毒浓度；用流式细胞仪测定T淋巴细胞的免疫功能(CD3+/CD4+/CD8+亚群)和早期凋亡和坏死；用荧光分光光度法检测细胞[Ca2+]i的变化；用试剂盒测定细胞Na+-K+-ATP酶和ca2+-Mg2+-ATP酶活力。结果5μg/mL、20μg/mL、80μg/mL PM2.5组淋巴细胞增殖功能与生理盐水组比较无明显差异；320μg/mL、800μg/mLPM2.5可抑制细胞增殖功能,且与生理盐水组比较有统计学意义(P<0.05); 5μg/mL,100μg/mLPM2.5组细胞上清LDH活性比生理盐水组略高,但无统计学差异,500μg/mL、800μg/mL PM2.5组LDH活性明显高于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05)。50μg/mL、100μg/mL、200μg/mLPM2.5染毒细胞24h和48h后,染毒组T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+百分含量、CD4+／CD8+比值)均低于生理盐水组,且染毒48h后的CD3+百分含量与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05).50μg/mL、100μg/mL、200μg/mLPM2.5染毒细胞24h、48h后,早期凋亡和坏死均升高,且100μg/mL、200μg/mL组与生理盐水组差异均具有统计学差异。200μg/mL PM2.5染毒细胞1h、3h、6h、12h、24h后,胞内钙离子浓度均高于生理盐水组,除24h外,均具有统计学差异(P<0.05)；在3h时胞内钙离子浓度最高,随时间延长,钙浓度逐渐降低。100μg/mL、200ng/mLPM2.5组染毒细胞3h后,各组钙浓度与生理盐水组差异有统计学意义；随染毒浓度的升高,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力有降低的趋势,且Na+-K+-ATP酶的活力在200μg/mLPM2.5组与生理盐水组比较有统计学差异(P<0.05)。结论尾气PM2.5能引起人外周血淋巴细胞免疫抑制,可能机制是细胞凋亡和钙稳态失衡。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
前言  11-13
第一部分 尾气污染对学龄儿童的细胞免疫毒性及凋亡诱导作用  13-28
  材料和方法  13-18
  结果  18-24
  讨论  24-27
  结论  27-28
第二部分 尾气PM_(2.5)对人外周血淋巴细胞免疫毒性及其相关机制  28-43
  材料与方法  28-31
  结果  31-39
  讨论  39-42
  结论  42-43
参考文献  43-46
附件Ⅰ综述  46-51
个人简历  51-52
致谢  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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