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薯蓣皂苷诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡及作用机制研究

作　者: 呼明明
导　师: 彭金咏
学　校: 大连医科大学
专　业: 药理学
关键词: 薯蓣皂苷 SGC-7901细胞凋亡死亡受体通路线粒体通路
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：研究薯蓣皂苷对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法：首先以10-羟基喜树碱做阳性对照,MTT法来测定薯蓣皂苷不同剂量(0、0.65、1.3和2.6μg/ml,终浓度)和不同时间(12、24、48和72 h)对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用；AO/EB双荧光染色法从细胞的形态上观察细胞的凋亡情况；利用流式细胞仪通过AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及坏死率；利用放射免疫测定(Radio-immunity assay RIA)细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度；采用半胱天冬酶(Caspase)活性试剂盒检测Caspase-3和Caspase-8的活化程度；最后采用western blotting和半定量逆转录聚合酶连反应(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)方法考察相关蛋白Fas、FasL、TNF-α、tumor necrosis factor receptor 1 (TNFR1)、tumor necrosis factor receptor associated factor-1(TRAF-1)、Fas-associated protein with death domain (FADD)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、BAK、细胞色素C、Bid、procaspase-3、p53、vimentin及mRNA的表达情况。结果：薯蓣皂苷可显著抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,呈剂量依赖性。作用48小时后,低浓度的薯蓣皂苷对SGC-7901细胞生长的抑制作用显著高于高浓度10-羟基喜树碱的抑制作用。AO/EB荧光染色可以明显看到薯蓣皂苷作用后贴壁细胞数量明显减少,并出现大量橘红色荧光的凋亡细胞。流式细胞仪测定结果可知,随着给药剂量的加大,细胞的早、晚期凋亡和坏死率逐渐升高。同时,薯蓣皂苷可以显著升高细胞上清液中TNF-α的浓度。进一步的机制研究表明,与空白组相比,薯蓣皂苷(2.6μg/ml)可上调Fas/FasL蛋白及mRNA的表达,分别上调达2.78/22.5倍和3.75/2.11倍；上调TNFR1/TNF-α的mRNA表达,达1.13/2.56倍；1.3和2.6μg/ml的薯蓣皂苷均可显著升高死亡受体相关因子TRAF-1的蛋白表达,达1.99和1.89倍;薯蓣皂苷亦能上调死亡结构域相关蛋白FADD的蛋白及mRNA表达。以上结果表明死亡受体通路被激活。此外,与空白组相比,给予2.6μg/ml的薯蓣皂苷能下调抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白及Bcl-xl mRNA的表达,分别达2.4和1.4倍；上调促凋亡蛋白Bax的表达及BAK蛋白和mRNA的表达,分别达14.1、1.36和1.28倍；下调Bid蛋白及mRNA的表达,分别达9和2倍；促进细胞色素C从线粒体向胞浆基质中释放,说明线粒体通路被激活。同时薯蓣皂苷能显著下调procaspase-3的表达,并增强Caspase-3和-8酶的活化。与空白对照组相比,薯蓣皂苷还可显著上调抑癌基因p53的mRNA表达(p<0.01)及显著下调波形蛋白的表达(p<0.001)。结论：本实验首次发现薯蓣皂苷能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其凋亡,并发现薯蓣皂苷的抗肿瘤作用与激活死亡受体通路和线粒体通路有关,这为薯蓣皂苷的深入研究和开发提供了实验资料,具有较为深远的意义。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
材料和方法  10-17
结果  17-33
讨论  33-37
结论  37-38
参考文献  38-42
综述  42-53
  (一) 正文  42-50
  (二) 参考文献  50-53
附录  53-55
致谢  55-56

薯蓣皂苷诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡及作用机制研究

内容摘要

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