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BCRP和TOPOII在裸鼠A549/CDDP多药耐药移植瘤模型中的表达和意义

作　者: 刘锐
导　师: 潘永成；王家顺
学　校: 华中科技大学
专　业: 胸外科
关键词: 多药耐药 A549/CDDP 移植瘤 BCRP和TOPOⅡ 动物模型
分类号: R730.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 11次
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内容摘要


目的通过培养体外人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC) A549多药耐药细胞系,建立裸鼠A549/顺铂(CDDP)耐药移植肿瘤模型,检测移植瘤细胞乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)及拓扑异构酶II(TOPOⅡ)基因和蛋白的表达,并探讨其在肿瘤多药耐药方面的意义。方法以CDDP为诱导,通过大剂量间歇诱导法和逐步增加剂量法,得到多药耐药细胞系A549/CDDP。于裸鼠左侧颈部皮下分别接种A549细胞系和A549/CDDP耐药细胞系各3×105个/0.3ml建立移植肿瘤模型。观察肿瘤生长特性,瘤体原代培养后,用四甲基偶氮唑兰(MTT)法分别检测该移植瘤细胞对依托泊苷,阿霉素,诺维本,顺铂及5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐药性,并计算出耐药指数(resistance index, RI),通过RT-PCR法以及Western-blot法分别检测乳腺癌耐药蛋白(BCRP),以及DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)的mRNA和蛋白的表达。结果①至处死裸鼠之前,A549组和A549/CDDP组中裸鼠均无死亡。在同一时间,A549组肿瘤生长速度较A549/CDDP组生长速度快。A549组瘤体重量(2.23±0.34g)和A549/CDDP组瘤体重量(2.15±0.27)g无明显差异(P>0.05)。②在显微光镜观察下原代培养A549组及A549/CDDP组移植瘤细胞均为贴壁生长,A549组移植瘤细胞为梭形,柳叶状。而A549/CDDP组移植瘤细胞较小,为不规则形态。③A 549/CDDP组移植瘤细胞对顺铂的50%的抑制浓度为A549组的17.3倍,对依托泊苷,阿霉素,诺维本,5-FU的耐药性也明显高于A549组移植瘤细胞。耐药指数分别为5.1,5.4,2.7,16.5。④R T-PCR结果显示,BCRP和TOPOⅡ在两组移植瘤细胞中均有表达,BCRP在A549/CDDP组中的表达量较高;而TOPOII在A549组中的表达量较高,两者相比差异均有统计学差异(P<0.001)⑤Western-blot检测提示,在A549/CDDP组移植瘤细胞和A549组移植瘤细胞中,BCRP蛋白和TOPOⅡ蛋白均有不同程度的表达,但是在A549/CDDP组中BCRP蛋白表达程度较高,在A549组中TOPOⅡ蛋白表达程度较高。结论成功的建立了裸鼠A549/CDDP耐药移植瘤模型,发现其耐药细胞系有明显的多药耐药性,并且BCRP的高表达和TOPOⅡ的低表达可能与其多药耐药性有关。

全文目录


中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-11
第一部分 人A549/cDDP 细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立  11-17
  1 实验材料  11-12
    1.1 药物与试剂  11
    1.2 实验动物  11-12
    1.3 仪器  12
  2 实验方法  12-13
    2.1 细胞传代培养  12
    2.2 A549/CDDP 耐药细胞系的建立  12
    2.3 A549/CDDP 裸鼠皮下移植瘤模型的建立以及移植瘤细胞原代培养  12-13
    2.4 MTT 法检测A549/CDDP 组皮下移植瘤细胞多药耐药性  13
  3 实验结果  13-17
    3.1 2 组裸鼠的一般情况  13
    3.2 裸鼠移植瘤瘤体的体积和重量的比较  13-14
    3.3 移植瘤细胞的形态与超微结构  14
    3.4 两组裸鼠移植瘤细胞对多种化疗药物的敏感度  14-17
第二部分 RT-PCR 和Western-blot 法检测BCRP 和TOPOII 在移植瘤中的表达  17-26
  1. 实验材料  17-18
    1.1 试剂  17-18
    1.2 实验仪器  18
  2 实验方法  18-23
    2.1 RT-PCR 法检测两组移植瘤细胞中BCRP 和TOPOIIm RNA 的表达  18-21
    2.2 Western-blot 法检测各组移植瘤细胞BCRP 和TOPOⅡ蛋白表达  21-23
  3. 统计学方法  23
  4. 实验结果  23-26
    4.1 各组移植瘤细胞的BCRP 和TOPOⅡmRNA 表达水平  23
    4.2 各组移植瘤细胞的BCRP 和TOPOⅡ蛋白表达水平  23-26
讨论  26-28
参考文献  28-31
综述  31-47
  参考文献  42-47
附录攻读学位期间发表论文目录  47-48
致谢  48-49

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤治疗学
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