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5-Aza-CdR对绒毛膜癌细胞JEG-3 Dnmts/Mbd2表达及生长调控的研究

作　者: 王元虎
导　师: 何俊琳
学　校: 重庆医科大学
专　业: 遗传学
关键词: 5-Aza-CdR 绒毛膜癌 DNA甲基化转移酶细胞凋亡
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
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内容摘要

绒毛膜癌(chorionic carcinoma,CH)简称绒癌,是一种极为常见的、高度恶性的妊娠性滋养细胞肿瘤( gestational trophoblastic neoplasia,GTN),其临床治疗以化疗为主,治愈率可达90%。然而,近年来难治性、多药耐药性绒癌的增多,使临床治愈率大大降低,因此寻找安全、有效且毒副作用小的抗绒癌药物,首要解决的问题就是阐明绒癌发生的机制。绒癌发病机制较为复杂,遗传学研究显示多种原癌基因、抑癌基因、细胞转录因子的表达异常以及激素水平异常与其发病相关[1,2]。目前研究发现,由表观遗传,如DNA甲基化异常引发的基因转录异常可能在绒癌的发生机制中发挥重要作用,但是其机制并不明了。DNA甲基化是一个逆转的修饰过程,且该逆转可直接恢复肿瘤细胞中某些抑癌基因的功能[3-6]。因此,从控制DNA甲基化的关键酶的表达角度去探讨绒癌的增殖、侵袭和凋亡等绒癌发生中的重要事件,可为临床上认识并寻找新的治疗策略提供实验依据。本研究采用不同浓度(1、4、8、16、32μmol/L)DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR处理绒毛膜癌JEG-3细胞,应用Real Time PCR及Western印迹检测5-Aza-CdR处理细胞后DNA甲基化转移酶(DNAmethyltransferases,Dnmts)、DNA去甲基化酶(Methyl-DpG binding domain protein 2,Mbd2)mRNA及其蛋白的表达变化。进一步研究其对细胞生长特征的影响,包括细胞形态学变化、细胞增殖水平变化、细胞凋亡及细胞侵袭能力的改变。研究发现:(1) Real Time PCR检测Dnmt1、Dnmt3a mRNA的表达显示,5-Aza-CdR可降低Dnmt1、Dnmt3a mRNA的表达,且呈剂量依赖关系,与对照组相比差异显著(P <0.05)。而Dnmt3b、Mbd2 mRNA表达水平几乎未受到影响,与对照组相比,无统计学意义(P >0.05)。(2) Western-blotting结果显示,5-Aza-CdR可明显降低Dnmt1、Dnmt3a mRNA的表达水平,并呈剂量依赖关系(P <0.05);Dnmt3b、Mbd2蛋白表达差异不明显(P >0.05)。(3)用5-Aza-CdR处理JEG-3细胞48 h后,显微镜观察发现细胞明显皱缩、细胞核聚集成块,死亡漂浮细胞明显增多,细胞长势较差。(4) MTT实验结果显示,不同浓度的5-Aza-CdR均可抑制JEG-3细胞增殖,并呈剂量和时间依赖关系。(5)流式细胞术检测结果显示,随着5-Aza-CdR浓度的增加,JEG-3细胞凋亡率显著增加(P <0.01)。5-Aza-CdR可促进细胞凋亡。(6) Transwell小室检测5-Aza-CdR对JEG-3细胞侵袭能力表明10μmol/L的5-Aza-CdR可显著降低细胞的侵袭能力(P <0.01)。综上,5-Aza-CdR可抑制Dnmt1、Dnmt3a mRNA和蛋白的表达。而不影响Dnmt3b、Mbd2mRNA和蛋白的表达。5-Aza-CdR可致JEG-3细胞皱缩、细胞核聚集成块,可明显抑制细胞增殖,促进其凋亡,降低细胞的侵袭力。Dnmt1、Dnmt3a可能在绒癌的增殖、侵袭和凋亡中发挥着重要作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-10
英文摘要  10-13
前言  13-14
1 材料  14-18
2 方法  18-26
3 结果  26-35
4 讨论  35-39
全文总结  39-40
参考文献  40-42
文献综述  42-50
致谢  50-51
攻读硕士学位期间发表的论文  51

5-Aza-CdR对绒毛膜癌细胞JEG-3 Dnmts/Mbd2表达及生长调控的研究

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