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长春花吲哚生物碱检测的方法及其分离纯化

作　者: 张静
导　师: 刘兆普
学　校: 南京农业大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 反相高效液相色谱 文多灵 长春新碱 长春质碱 长春碱 蛇根碱
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


长春花(Catharanthus roseus (L.) G. Don)是夹竹桃科(Apocynaceae)长春花属植物,在我国长江以南地区广为种植。长春花中含有大量的生物碱,其中萜类吲哚生物碱具有广谱抗肿瘤活性,能治疗多种癌症。对长春花体内各种生物碱的检测和提纯在长春花工业化生产上具有重要的理论和实践意义。本研究采用RP-HPLC、超声波-甲醇提取和大孔树脂纯化建立了长春花5种吲哚生物碱的分析方法和样品制备方法,探讨了4种主要长春花生物碱提取工艺优化、大孔树脂纯化长春碱的方法,确定了富有特色的分离提取工艺。结果如下：建立了长春花中文多灵、长春新碱、长春质碱、长春碱和蛇根碱等5种生物碱的检测方法。色谱条件：色谱柱采用Agilent C18ODS (250 mm×4.6 mm,5μm);流动相：250 mL水-三乙胺(990：10,用磷酸调节pH 7.2)与750 mL甲醇-乙腈(4：1)混合：流速0.8 mL/min;进量样：20μL；柱温：21℃；检测波长：220 nm。获得了文多灵、长春新碱、长春质碱和长春碱超声波-甲醇提取优化方法。提取条件如下：甲醇(pH 4.0)；料液比：1：15；提取温度：45℃,提取时间：150 min；文多灵和长春质碱平均得分别为0.164%、0.081%。确立了大孔吸附树脂富集纯化长春碱的条件：上样量比为树脂：样品=5：1,样品浓度0.5 mg/mL,洗脱液为95%乙醇溶液,比洗脱量为25 mL/g的饱和树脂,树脂再生条件为：先用盐酸浓度为5%淋洗,再用氢氧化钠浓度为3%洗至中性,然后用乙醇浸泡后,最后用大量蒸馏水洗至无醇味。树脂可循环利用4次,经再生后的树脂其吸附效果可达到原树脂吸附能力的90%以上。

全文目录


摘要  8-9ABSTRACT  9-11缩略语表  11-12第一章 文献综述  12-36  1.1 长春花简介  12-21    1.1.1 长春花基本生物学特征及分布  12-13    1.1.2 长春花萜类吲哚生物碱概述  13-19    1.1.3 长春花研究现状  19-21  1.2 长春碱萜类生物碱测定方法简介  21-24    1.2.1 RP-HPLC技术在长春花生物碱分析中的利用  21-22    1.2.2 长春花生物碱的RP-HPLC测定方法  22-24  1.3 生物碱常用提取方法  24-29    1.3.1 溶剂提取  24-26    1.3.2 超临界萃取法  26-27    1.3.3 超声波提取法  27    1.3.4 匀浆法提取  27-28    1.3.5 微波提取  28    1.3.6 膜提取法  28    1.3.7 渗漉-薄膜蒸发连续提取法  28-29  1.4 长春花萜类吲哚生物碱分离纯化技术  29-34    1.4.1 薄层色谱法  29    1.4.2 柱色谱法  29-31    1.4.3 大孔树脂分离法  31-33    1.4.4 高速逆流色谱分离法  33-34  1.5 本课题研究的目的和意义  34-36第二章 长春花吲哚生物碱的RP-HPLC测定方法  36-48  2.1 材料与方法  36-37    2.1.1 仪器  36    2.1.2 试剂和材料  36-37    2.1.3 样品来源  37    2.1.4 标准样品的制备  37  2.2 结果与分析  37-46    2.2.1 检测波长的确定  37    2.2.2 流动相的选择  37-40    2.2.3 缓冲液pH值的确定  40    2.2.4 流动相流速的确定  40-41    2.2.5 标准曲线的绘制  41-45    2.2.6 方法的精密度考察  45    2.2.7 重现性考察  45-46    2.2.8 供试样品的稳定性考察  46  2.3 讨论  46-48第三章 长春花吲哚生物碱的提取  48-60  3.1 材料与方法  48-50    3.1.1 材料、仪器与试剂  48    3.1.2 提取方法  48-49    3.1.3 试验设计  49    3.1.4 分析方法  49-50    3.1.5 数据处理与分析  50  3.2 结果与分析  50-57    3.2.1 不同提取方法对文多灵、长春质碱、长春新碱和长春碱提取率的比较  50-51    3.2.2 提取溶剂对超声波法提取效率的影响  51-52    3.2.3 pH值、时间、温度、料液比和频率对超声波-甲醇提法提取效果的影响  52-55    3.2.4 超声波-甲醇法提取长春花中文多灵与长春质碱的条件优化  55-57  3.3 讨论和结论  57-60第四章 大孔树脂在纯化长春碱中的应用  60-72  4.1 材料与方法  60-66    4.1.1 树脂的预处理  60    4.1.2 树脂含水率的测定  60    4.1.3 树脂的选择  60-61    4.1.4 动态吸附实验  61-62    4.1.5 长春碱泄漏曲线的测定  62-63    4.1.6 解吸附试验  63-64    4.1.7 树脂的利用度及再生条件  64-65    4.1.8 讨论与结果  65-66  4.2 结果与分析  66-70    4.2.1. 结晶溶剂系统的选择  66-67    4.2.2 结晶溶液浓度与硫酸长春碱得率的关系  67    4.2.3 硫酸长春碱溶解度的测定  67-68    4.2.4 结晶次数对硫酸长春碱产品纯度及得率的影响  68    4.2.5 冷却方式对结晶过程的影响  68-69    4.2.6 重现性实验  69-70  4.3 讨论与结论  70-72全文结论  72-74创新点  74-76攻读硕士学位期间发表论文  76-78致谢  78-80参考文献  80-87

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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