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1.敬钊缨毛蛛毒素组学研究 2.间斑寇蛛粗毒抗血清制备

作　者: 晏晓军
导　师: 王贤纯；梁宋平
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 敬钊缨毛蛛蛋白质组学粗毒反相高效液相色谱双向凝胶电泳 N-端测序二级质谱间斑寇蛛抗血清制备纯化中和毒素
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

第一部分敬钊缨毛蛛毒素组学研究敬钊缨毛蛛主要分布于中国海南省，其粗毒中含有许多具有不同生物活性的多肽和蛋白质。我们采用蛋白质组学的方法对敬钊缨毛蛛粗毒进行全息分析。经分子筛柱层析将毒素分成两部分后，分子量10kDa以下的多肽经过阳离子交换色谱及反相高效液相色谱进行分离，并采用MALDI-TOF MS测定各色谱峰成分的分子量，以及Edman降解测序测定部分多肽序列。分子量10kDa以上的蛋白质经过双向凝胶电泳分离，并采用CapLC-ESI-Q-TOF MS及MALDI-TOF／TOF MS进行鉴定。MALDI-TOF MS质谱结果表明毒素含有大约150余种多肽，其中22种多肽的全序列得到测定，另有20种多肽测定了部分序列。2-DE胶上共显示250个左右蛋白质点，其中的19个蛋白质点经Mascot数据库搜寻得到鉴定，另有55个蛋白质点经MS BLAST搜寻得到鉴定。本研究结果首次提供了敬钊缨毛蛛毒素蛋白质组学图谱，揭示了蜘蛛毒素种类的复杂性及功能的多样性，有助于全面了解该蜘蛛毒素的中毒机理。第二部分间斑寇蛛毒素抗血清制备间斑寇蛛是世界上毒性最强的蜘蛛之一，在世界范围内均有分布。此种蜘蛛咬伤将引起非常严重的中毒症状，其最有效治疗方式是使用本种蜘蛛毒素的特异性抗体进行治疗。但现在并无针对此种蜘蛛毒素的特异性抗体出售。而事实上，此种蜘蛛毒液中含有许多大分子蛋白质，可用于制备抗血清。本研究采取免疫豚鼠的方法制备间斑寇蛛粗毒抗血清。将间斑寇蛛粗毒过滤除菌后作为抗原，分别加弗氏完全佐剂和不完全佐剂等免疫豚鼠，采用背部皮下注射进行免疫，加强免疫每隔8-10天进行一次。第二次加强免疫后开始取血采用免疫双向扩散法检测抗血清效价。待抗血清效价合格后断颈处死豚鼠放血，分离血清，经饱和硫酸铵分级沉淀及阴离子柱层析纯化后，采用western blot法检测抗体所在峰，并采用离体大鼠输精管电刺激收缩反应实验及活体小鼠给药实验检验抗体对毒素的中和作用。第三次加强免疫后抗血清效价达到1：8，然后进行第四次加强免疫并采血取血清。抗血清经分级沉淀后去除了较多杂蛋白，经阴离子交换柱层析后得到进一步纯化。实验表明，抗血清能够抑制问斑寇蛛粗毒对大鼠输精管电刺激收缩反应的阻断作用，也能有效抑制粗毒对小鼠的致死作用。特异性间斑寇蛛毒素抗血清的成功制备为治疗间斑寇蛛咬伤的新药开发奠定了重要的基础。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-10
第一章文献综述及本论文研究的目的意义  10-30
  1 蜘蛛毒素研究概况  10-11
  2 关于蜘蛛毒素的研究方式  11-27
  3 本论文的研究目的意义  27-30
第二章敬钊缨毛蛛毒素组学研究  30-68
  1 材料与仪器  30-32
  2 实验方法  32-43
  3 实验结果  43-53
  4 讨论  53-66
  5 进一步研究设想  66-68
第三章间斑寇蛛毒素抗血清研究  68-89
  1 材料与仪器  68-69
  2 实验方法  69-79
  3 实验结果  79-84
  4 讨论  84-87
  5 进一步研究设想  87-89
参考文献  89-106
文章发表和投递情况  106-108
缩略表(中英文对照)  108-110
致谢  110-111

1.敬钊缨毛蛛毒素组学研究 2.间斑寇蛛粗毒抗血清制备

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