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复方氨氯地平替米沙坦的体内分析方法及其临床前药代动力学研究

作　者: 张鹤
导　师: 吴玉田；范国荣
学　校: 第二军医大学
专　业: 药物分析学
关键词: 氨氯地平替米沙坦复方制剂 HPLC/MS/MS法反相高效液相色谱法 Beagle犬临床前药代动力学
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

氨氯地平是二氢吡啶类钙拮抗剂(钙离子拮抗剂或慢通道阻滞剂),直接作用于血管平滑肌,降低外周血管阻力,从而降低血压。替米沙坦是一种口服起效的,特异性血管紧张素Ⅱ受体(AT1型)拮抗剂,能够通过阻滞肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)从而降低血压,目前已广泛用于高血压病的治疗。有文献报道,替米沙坦与氨氯地平联合用药能有效控制患者肾性高血压,并能明显改善肾功能。替米沙坦联合苯磺酸氨氯地平不仅能控制高血压,而且能够逆转高血压引起的左心室肥厚,疗效、安全性及耐受性均好。本文的工作旨在对其临床前药代动力学及合并用药相互作用做一整体评价,以支持人体药代动力学研究并为临床用药提供参考依据。一、生物样品中氨氯地平定量分析方法的建立本文采用LC-MS/MS法测定生物样品中氨氯地平的浓度,生物样品以NaOH碱化后用乙酸乙酯提取其中的氨氯地平,选择盐酸克伦特罗作为内标化合物。质谱分析采用DiamonsilTM(钻石)C18 5μm 100×4.6mm ID(迪马公司)色谱柱,等梯度洗脱方式,流动相组成为甲醇:水=80:20 (含0.05%甲酸),流速为0.8ml/min,3:2分流进样,流入质谱的流速为0.32ml/min,柱温30℃,进样量20μl,分析时间4.0 min。生物样品中的内源性物质不干扰样品的测定,经方法验证,在各自的生物样品浓度范围内,均呈良好线性,线性范围为2.03～507.5ng/ml,r>0.99;所有测定生物样品方法的日内RSD为2.71～4.78%,日间RSD为3.71～5.99%。说明该方法的准确度、精密度、灵敏度、专属性及定量线性等均符合生物样品的分析要求,可以用于以氨氯地平表征的氨氯地平替米沙坦复方试验药物的临床前药代动力学研究。二、生物样品中替米沙坦定量分析方法的建立本文采用反相高效液相色谱法测定生物样品中替米沙坦的浓度,生物样品经乙腈沉淀蛋白后用直接进样测定样品中的替米沙坦,选择萘普生作为内标化合物。色谱分析采用DiamonsilTM(钻石)C18 5μm 150×4.6mm ID(迪马公司)色谱柱,等梯度洗脱方式,流动相组成乙腈-40mmol/L磷酸二氢钠溶液-磷酸=42:58:0.02(V/V/V),;流速:1.0ml/min;荧光激发波长为305nm,发射波长365nm;柱温:35℃;进样量20μl,分析时间11 min。生物样品中的内源性物质不干扰样品的测定,经方法验证,在各自的生物样品浓度范围内,均呈良好线性,线性范围为5.025～1005ng/ml ,r>0.99;所有测定生物样品方法的日内RSD为2.19～4.87%,日间RSD为4.25～5.64%。高浓度血浆样品经稀释后不影响其实际血药浓度,说明血浆中替米沙坦的高效液相色谱分离分析方法的准确度、精密度、灵敏度、专属性及定量线性等均符合生物样品的分析要求,可以用于以替米沙坦表征的氨氯地平替米沙坦复方试验药物的临床前药代动力学研究。三、Beagle犬不同比例组方单剂量口服给药单方对照药物及复方试验药物的临床前药代动力学研究本文采用自身对照、随机交叉试验方法,选择三制剂三周期的3×3拉丁方设计给药方案,Beagle犬单剂量口服给药苯磺酸氨氯地平对照药物、替米沙坦对照药物以及氨氯地平替米沙坦复方试验药物后,于不同时间点取血,用上述建立的方法分别测定血浆中氨氯地平及替米沙坦的浓度,根据所得的血浆药物浓度-时间曲线,采用非房室模型分别估算以氨氯地平和替米沙坦表征的氨氯地平替米沙坦复方试验药物的药代动力学参数,并采用方差分析和双单侧t检验进行统计比较分析,考察氨氯地平替米沙坦复方试验药物中氨氯地平和替米沙坦不同比例组方合并用药的药代动力学相互影响。单剂量试验结果表明:以氨氯地平表征的氨氯地平替米沙坦复方试验药物的相对生物利用度为82.7%～117.9%,生物利用度符合要求。进一步对lnCmax、lnAUC0～72进行双单侧t检验,结果显示氨氯地平复方试验药物和氨氯地平对照药物双单侧t检验合格,即不同比例组方下单用氨氯地平及与替米沙坦合用(氨氯地平替米沙坦复方试验药物)时氨氯地平的主要药代动力学参数无明显改变,表明氨氯地平替米沙坦不同比例组方复方试验药物合并用药不存在药代动力学相互影响。以替米沙坦表征的氨氯地平替米沙坦复方试验药物的相对生物利用度为88.7%～120.8%,生物利用度符合要求。进一步对lnCmax、lnAUC0～72进行双单侧t检验,结果显示氨氯地平替米沙坦复方试验药物和替米沙坦对照药物双单侧t检验合格,即不同比例组方下单用替米沙坦及与氨氯地平合用(氨氯地平替米沙坦复方试验药物)时以替米沙坦的主要药代动力学参数无明显改变,表明氨氯地平替米沙坦不同比例组方复方试验药物合并用药不存在药代动力学相互影响。四、Beagle犬低中高剂量口服给药氨氯地平替米沙坦复方试验药物的临床前药代动力学研究本试验根据药效学研究提供的实验数据结果,以氨氯地平:替米沙坦比例1:6为最佳组方,1:6组方给药的临床前药代动力学研究中的给药剂量作为中剂量,设计成年、健康Beagle犬静口服给药氨氯地平替米沙坦低、中、高三个剂量组进行药代动力学研究。将18条犬随机分成3组,分别口服给药氨氯地平替米沙坦复方低剂量(以氨氯地平计5.4mg,替米沙坦32.4mg),中剂量(以氨氯地平计10.8mg,替米沙坦64.8mg),高剂量(以氨氯地平计21.6mg,替米沙坦129.6mg),测定血浆中氨氯地平和替米沙坦浓度。Beagle犬单剂量口服低中高剂量氨氯地平替米沙坦后实验结果表明,口服低、中、高剂量剂量后的氨氯地平的Cmax和AUC0~72h分别为63.08±12.37ng/ml和790.17±57.35ng?h/ml、86.83±14.40ng/ml和1675.58±287.82ng?h/ml、160.75±39.43ng/ml和3501.24±859.69ng?h/ml。替米沙坦的Cmax和AUC0~72h分别为1221.58±241.64ng/ml和6314.02±305.25ng?h/ml、1949.52±243.30ng/ml和12143.51±959.75ng?h/ml、4472.15±485.71ng/ml和24315.48±2039.78ng?h/ml。五、Beagle犬多剂量口服给药氨氯地平替米沙坦复方试验药物的临床前药代动力学研究达稳态过程服药每日1次,每次给药中剂量氨氯地平替米沙坦复方(以氨氯地平计10.8mg,替米沙坦64.8mg),连续四天,即受试犬禁食过夜后,于每日口服给药中剂量氨氯地平替米沙坦复方。第五天一次给药中剂量氨氯地平替米沙坦复方(以氨氯地平计10.8mg,替米沙坦64.8mg)后,考察稳态药代动力学特征。Beagle犬单剂量口服多剂量氨氯地平替米沙坦复方后氨氯地平的稳态Cmax和AUC0~72h为101.45±24.40ng/ml和1761.26±328.86 ng?h/ml,以单剂量口服氨氯地平替米沙坦复方的药动学参数为参比,用梯形面积法(AUC)氨氯地平替米沙坦多剂量口服达稳态后的相对生物利用度为105.6%±13.5%。经三因素方差分析显示,多剂量口服氨氯地平替米沙坦复方药物和单剂量口服氨氯地平替米沙坦的各主要药代动力学参数均无显著性差异。即多剂量服用氨氯地平替米沙坦复方药物,体内氨氯地平无明显蓄积。替米沙坦的稳态Cmax和AUC0~72h为1975.80±73.38ng/ml和13431.64±1222.22 ng?h/ml。以单剂量口服氨氯地平替米沙坦复方的药动学参数为参比,用梯形面积法(AUC)氨氯地平替米沙坦多剂量口服达稳态后的相对生物利用度为110.7%±6.6%。经三因素方差分析显示,多剂量口服氨氯地平替米沙坦复方药物和单剂量口服氨氯地平替米沙坦的各主要药代动力学参数均无显著性差异。即多剂量服用氨氯地平替米沙坦复方药物,体内替米沙坦无明显蓄积。

全文目录

中文摘要  6-9
Abstract  9-12
前言  12-16
第一章生物样品中氨氯地平定量分析方法的建立与确证  16-25
  概述  16
  1. 材料和仪器  16-17
  2. 实验方法与结果  17-23
  3. 讨论  23-24
  4. 小结  24-25
第二章生物样品中替米沙坦定量分析方法的建立与确证  25-33
  概述  25
  1. 材料和仪器  25-26
  2. 实验方法与结果  26-31
  3. 讨论  31-32
  4. 小结  32-33
第三章 Beagle犬单剂量口服给药单方对照药物及氨氯地平替米沙坦复方试验药物的临床前药代动力学研究  33-80
  概述  33
  1. 氨氯地平与替米沙坦1：4 组方给药的临床前药代动力学研究  33-48
  2. 氨氯地平与替米沙坦1：6 组方给药的临床前药代动力学研究  48-62
  3. 氨氯地平与替米沙坦1：8 组方给药的临床前药代动力学研究  62-76
  4. 讨论与小结  76-80
第四章 Beagle犬单剂量不同剂量给药氨氯地平替米沙坦复方试验药物的临床前药代动力学研究  80-95
  概述  80
  1. 材料和仪器  80
  2. 实验方法  80-81
  3. 实验结果  81-94
  4. 小结  94-95
第五章 Beagle犬多剂量给药氨氯地平替米沙坦复方试验药物的临床前药代动力学研究  95-110
  概述  95
  1. 材料和仪器  95
  2. 实验方法  95-96
  3. 实验结果  96-110
结语  110-112
参考文献  112-115
综述  115-121
致谢  121-122
在读期间论文发表情况  122

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