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硫酸长春新碱脂质体的研究

作　者: 赵妍
导　师: 邓意辉；李焕秋
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药剂学
关键词: 硫酸长春新碱脂质体 PEG包衣脂质体 pH梯度法 (NH4)SO4梯度法
分类号: R94
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

本文采用主动载药法中的pH梯度和（NH₄）₂SO₄梯度两种方法制备硫酸长春新碱脂质体，以期增强药物靶向性、提高疗效，并降低毒副作用。采用PEG包衣提高脂质体稳定性、改善药物释放速率，进而增强硫酸长春新碱脂质体的抗肿瘤活性。建立了阳离子交换树脂—高效液相色谱（HPLC）法测定硫酸长春新碱脂质体包封率。阳离子交换树脂可以完全吸附脂质体中的游离药物，使脂质体与游离药物分离。采用HPLC测定硫酸长春新碱浓度，进而计算脂质体包封率；该方法简便、可行。本文以包封率为指标，考察孵化温度、孵化时间、药脂比（药物／月旨质）、外水相碱性溶液、冻融条件及不同制备工艺对脂质体包封率的影响，确定了最佳处方。采用pH梯度和（NH₄）₂SO₄梯度法制备传统脂质体的包封率分别为86.60％和70.81％，经PEG包衣后分别达到92％和97％以上。考察10种外水相pH调节剂对硫酸长春新碱脂质体包封率的影响，证明pH调节剂显著影响脂质体包封率，其中以Na₂HPO₄、NaHCO₃为好。以pH梯度法为研究对象，测定了硫酸长春新碱跨膜活化能，并研究PEG包衣对活化能的影响，结果PEG包衣前后活化能分别为20.44kcal／mol和16.28kcal／mol，证明PEG包衣有利于硫酸长春新碱的跨膜转运。采用透析法测定硫酸长春新碱脂质体体外释放度，直接混合法测定血浆释放度，并比较pH梯度法制备的硫酸长春新碱脂质体和PEG包衣脂质体在体外释放度、血浆释放度、粒度分布以及稳定性等方面的差异。结果表明，PEG包衣后脂质体在生理盐水及血浆中的释放度明显降低；粒度减小（传统脂质体平均粒径为219.7nm，PEG包衣脂质体平均粒径为157.8nm），贮存物理稳定性提高。采用蒸发光散射检测器（ELSD）测定空白脂质体中磷脂含量，考察空白脂质体在40℃和光照条件下外观、pH值、包封率、磷脂含量及粒度分布的变化情况。结果表明，经40℃和光照后空白脂质体载药后包封率和磷脂含量略有下降，粒径略有增加，粒度分布加宽。两种硫酸长春新碱脂质体均未产生溶血现象。急毒实验结果表明，硫酸长春新碱溶液的LD₅₀为2.17±0.26mg／Kg；硫酸长春新碱脂质体的LD₅₀为2.44±0.27mg／Kg；说明硫酸长春新碱脂质体没有明显降低药物的毒性；但药效实验结果显示，传统脂质体和PEG包衣脂质体均提高硫酸长春新碱抗S180肿瘤的活性，使硫酸长春新碱的抑瘤率增强。

全文目录

中文摘要  10-12
英文摘要  12-14
前言  14-20
第一章硫酸长春新碱脂质体包封率测定方法的建立  20-28
  1 仪器与材料  20-21
    1.1 仪器  20
    1.2 材料  20-21
  2 方法与结果  21-26
    2.1 硫酸长春新碱脂质体中硫酸长春新碱的测定  21-24
      2.1.1 分析方法的建立  21-22
      2.1.2 标准曲线的绘制  22
      2.1.3 精密度  22-23
      2.1.4 检测限  23
      2.1.5 定量限  23
      2.1.6 方法回收率  23
      2.1.7 加样回收率  23-24
    2.2 阳离子交换树脂对脂质体和游离药物的分离  24-26
      2.2.1 阳离子交换树脂柱的制备  24
      2.2.2 阳离子交换树脂对水溶液中硫酸长春新碱的吸附  24-25
      2.2.3 阳离子交换树脂对脂质体与药物物理混合溶液中硫酸长春新碱的吸附  25
      2.2.4 阳离子交换树脂对空白脂质体的吸附  25
      2.2.5 阳离子交换树脂柱吸附能力的考察  25-26
    2.3 包封率的测定  26
  3 讨论  26-27
  4 小结  27-28
第二章硫酸长春新碱脂质体的制备  28-41
  1 仪器与试药  28-29
    1.1 仪器  28
    1.2 试药  28-29
  2 方法与结果  29-35
    2.1 pH梯度法制备硫酸长春新碱脂质体及包封率影响因素的考察  29-34
      2.1.1 硫酸长春新碱脂质体制备的基本工艺  29
      2.1.2 温度对包封率的影响  29-30
      2.1.3 pH调节剂对包封率的影响  30
      2.1.4 药脂比对包封率的影响  30-31
      2.1.5 冻融对包封率的影响  31
      2.1.6 包衣材料的影响  31-32
      2.1.7 pH梯度法中硫酸长春新碱摄入活化能的考察  32-33
      2.1.8 PEG包衣对活化能的影响  33-34
    2.2 (NH_4)_2SO_4梯度法制备硫酸长春新碱脂质体及包封率影响因素的考察  34-35
      2.2.1 硫酸长春新碱脂质体制备的基本工艺  34-35
      2.2.2 包衣材料的影响  35
  3 讨论  35-40
  4 小结  40-41
第三章硫酸长春新碱脂质体的稳定性和理化性质的研究  41-57
  1 仪器与材料  41-42
    1.1 仪器  41
    1.2 材料  41-42
  2 方法与结果  42-55
    2.1 释放度的考查  42-47
      2.1.1 体外释放实验  42-43
        2.1.1.1 分析方法的建立  42
        2.1.1.2 硫酸长春新碱脂质体体外释放度的测定  42-43
      2.1.2 血浆释放度  43-46
        2.1.2.1 方法的建立及验证  43-45
        2.1.2.2 阳离子交换柱的考察  45-46
        2.1.2.3 血浆释放度的测定  46
      2.1.3 注射液中渗漏的考察  46-47
    2.2 稳定性的考察  47-55
      2.2.1 影响因素实验  47-50
        2.2.1.1 降解情况  47-48
        2.2.1.2 外观变化  48
        2.2.1.3 包封率的变化  48-49
        2.2.1.4 粒径的变化  49-50
      2.2.2 高温实验  50-51
      2.2.3 空白脂质体稳定性的研究  51-55
        2.2.3.1 分析方法的建立  51-54
        2.2.3.2 空白脂质体稳定性的考查  54-55
  3 讨论  55-56
  4 小结  56-57
第四章硫酸长春新碱脂质体毒性及药效学的研究  57-68
  1 仪器与材料  57-58
    1.1 仪器  57
    1.2 试药  57-58
    1.3 动物  58
  2 方法与结果  58-67
    2.1 溶血性实验  58-59
    2.2 急性毒性实验  59-60
    2.3 药效学实验  60-67
      2.3.1 S180细胞的准备  60
      2.3.2 实验方法  60
      2.3.3 实验结果  60-67
        2.3.3.1 体重结果  60-66
        2.3.3.2 瘤重结果  66-67
  3 讨论  67
  4 小结  67-68
结论  68-70
参考文献  70-73
发表文章目录  73-74
致谢  74

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