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茶籽饼中茶皂素的提取纯化与茶籽多糖的提取
作 者: 谭搏
导 师: 曹福祥
学 校: 中南林业科技大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 反相高效液相色谱 茶油 茶皂素 茶籽多糖 超声波 提取 纯化
分类号: S571.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
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内容摘要
我国茶籽资源十分丰富,对茶籽饼粕进行综合开发利用,应用前景广阔,经济效益明显。本研究分别采用分光光度法和反相高效液相色谱法(HPLC)对茶籽饼中茶皂素进行检测,比较了两种定量分析方法,并确定了用反相高效液相色谱法检测茶籽饼中茶皂素的含量,同时采用苯酚-硫酸法对茶籽饼中茶籽多糖进行检测。优化了茶油、茶皂素和茶籽多糖的提取工艺;采用了大孔树脂对粗茶皂素进行纯化,得到高纯度茶皂素;提出了一整套工艺流程,有望实现从茶籽饼中得到茶油、茶皂素和茶籽多糖等产品。主要研究内容如下:(1)茶皂素的定量分析研究了反相高效液相色谱法(HPLC)测定茶皂素含量的方法:以VP-ODS (250 mm×4.6mm, C18,5μm)作分析柱,以甲醇-水(v/v=9/1)作流动相,流速控制在1.0 mL/min,检测波长280 nm,以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,得到工作曲线为Y=3.02×106X—1.16×104,线性相关系数为0.9995。回收率为97.02%-102.82%。通过反相高效液相色谱法测定茶籽饼中粗茶皂素的含量为11.89%。该法具有相对标准偏差较小,精密度和回收率高,操作简便等优点,是一种较好的分析方法。(2)茶籽多糖的分析方法采用苯酚-硫酸法测定茶籽多糖,于490 nm处测吸光度,得到葡萄糖标准曲线并线性回归得到方程式:Y=173.48X—28.262(Y表示葡萄糖含量/μg,X表示吸光度),回归系数r=0.9965。通过实验可得茶籽多糖的换算因子f=4.2783,根据公式:Y= mCf/M可计算茶籽多糖纯度。(3)茶油和茶皂素的提取依据茶油和茶皂素不同的物理与化学性质,采用了不同的萃取剂并进行比较,确定采用石油醚(沸程60℃~90℃)和甲醇溶液先后分别提取茶油和茶皂素。采用索氏抽提的方法提取茶油,采用超声波法提取粗茶皂素。石油醚提取茶油得率高、毒性低,且损耗少、回收率高。本实验优化条件提取茶油,在最佳工艺条件下进行实验,即加热时间2 h、料液比7 mL/g、回流速度5 min/次,茶油的提取率为7.5%。以纯甲醇为提取剂超声波辅助提取茶皂素。实验得出较佳提取工艺参数为:超声频率40kHz,提取溶液温度40℃,超声提取时间25 min,液固比为6 mL/g,超声功率250W,在此条件下进行实验,茶皂素得率为14.2%。(4)茶皂素的纯化采用大孔吸附树脂AB-8对粗茶皂素进行吸附,调节茶皂素溶液pH=5进行上样,结果表明:吸附量32.1 mg/mL树脂,吸附率88%。用1%的NaOH溶液进行洗脱,被吸附茶皂素中的杂质和色素大部分被洗除,然后采用85%-95%甲醇进行解吸,结果表明:茶皂素上样液pH=5、吸附时间2h后,先用1%的NaOH溶液洗脱除杂质和色素,再用95%甲醇洗脱(洗脱液与上样液体积比5:1),在此条件下得到的洗脱液浓缩至一定体积,经丙酮沉淀,甲醇结晶可得到高纯度的茶皂素晶体,测得其纯度为95.6%。(5)茶籽多糖的提取采用超声波法从油茶饼粕中提取茶籽多糖。通过单因素和正交实验得到了超声波辅助提取茶籽多糖的最佳工艺条件,即提取时间15 min,液固比16 mL/g、乙醇浓度50%、提取温度50℃C。在最佳提取条件下实验,茶籽多糖的得率为8.5%。
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全文目录
摘要 4-6 ABSTRACT 6-11 1 绪言 11-24 1.1 茶油的性质用途及提取方法 11-13 1.1.1 茶油的物化性质 11-12 1.1.2 茶油的用途 12 1.1.3 茶油的提取方法 12-13 1.2 茶皂素的结构和性质和应用 13-15 1.2.1 茶皂素的结构 13-14 1.2.2 茶皂素的理化性质 14-15 1.3 茶皂素的应用 15-16 1.3.1 茶皂素在农业方面的开发应用 15 1.3.2 茶皂素在日化行业的开发应用 15-16 1.3.3 茶皂素在医药行业的开发应用 16 1.3.4 茶皂素的其他用途 16 1.4 茶皂素的提取方法 16-18 1.4.1 水提法 16-17 1.4.2 水提—醇萃法 17 1.4.3 水提—沉淀法 17 1.4.4 醇提法 17 1.4.5 膜分离法 17-18 1.4.6 超声波法 18 1.5 茶皂素的纯化方法 18-19 1.5.1 大孔吸附树脂纯化法 18 1.5.2 正丁醇转萃法 18-19 1.5.3 超滤膜法 19 1.5.4 化学沉淀法 19 1.6 茶皂素的定量测定分析方法 19-20 1.6.1 分光光度法 19 1.6.2 重量分析法 19-20 1.6.3 其它方法 20 1.7 茶籽多糖的用途及提取方法 20-21 1.7.1 茶籽多糖的用途 20 1.7.2 茶籽多糖的提取方法 20-21 1.8 本课题的研究目的、意义和内容 21-24 1.8.1 课题的研究目的和意义 21 1.8.2 课题研究的主要内容 21-24 2 茶皂素与茶籽多糖分析方法的研究 24-35 2.1 高效液相色谱法测定茶皂素的研究 24-29 2.1.1 材料与方法 24-25 2.1.2 结果与讨论 25-29 2.1.3 结论 29 2.2 分光光度法测定茶皂素的研究 29-31 2.2.1 材料与方法 29-31 2.2.2 两种方法对比结果 31 2.3 苯酚-硫酸法测定茶籽多糖的研究 31-35 2.3.1 材料与方法 31-34 2.3.2 结论 34-35 3 茶籽饼脱脂和茶皂素的提取研究 35-48 3.1 茶籽饼脱脂的研究 35-40 3.1.1 材料与方法 35-37 3.1.2 结果与讨论 37-40 3.1.3 结论 40 3.2 超声波辅助提取茶皂素的工艺研究 40-48 3.2.1 材料与方法 40-42 3.2.2 结果与讨论 42-47 3.2.3 结论 47-48 4 大孔树脂纯化茶皂素的研究 48-57 4.1 材料与方法 48-51 4.1.1 仪器和试剂 48-49 4.1.2 粗茶皂素溶液的制备 49 4.1.3 大孔树脂的预处理和选择 49 4.1.4 吸附时间对吸附量的影响 49-50 4.1.5 PH值对吸附量的影响 50 4.1.6 NaOH洗脱液浓度对茶皂素产品的影响 50 4.1.7 洗脱液浓度对脱附率的影响 50 4.1.8 洗脱液体积对脱附率的影响 50 4.1.9 高纯度茶皂素的制取 50-51 4.2 结果与讨论 51-55 4.2.1 大孔树脂的选择 51 4.2.2 吸附时间对吸附率的影响 51-52 4.2.3 pH值对吸附量的影响 52-53 4.2.4 NaOH洗脱液浓度对茶皂素产品的影响 53 4.2.5 洗脱液浓度对脱附率的影响 53-54 4.2.6 洗脱液体积对脱附率的影响 54-55 4.2.7 高纯度茶皂素的制取 55 4.3 结论 55-57 5 超声波辅助提取茶籽多糖的研究 57-64 5.1 材料与方法 57-59 5.1.1 试剂和仪器 57-58 5.1.2 实验方法 58 5.1.3 单因素实验 58-59 5.1.4 正交实验 59 5.2 结果与讨论 59-63 5.2.1 各因素对提取茶籽多糖的影响 59-62 5.2.2 正交实验 62-63 5.3 结论 63-64 6 结论与创新 64-67 6.1 结论 64-65 6.2 创新点 65-67 参考文献 67-72 附录:攻读学位期间的主要学术成果 72-73 致谢 73
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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 饮料作物 > 茶
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