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汉黄芩素体外抗乳腺癌作用研究

作　者: 李化强
导　师: 谢明杰
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 黄芩汉黄芩素 MCF-7乳腺癌细胞细胞凋亡
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

癌症是威胁人类健康的重大疾病,癌症的分子发病机制和生物治疗一直以来都是学者们研究的重点。随着人们对癌症的发病机理认识的不断深入,在以往化学治疗、放射治疗、手术治疗三大疗法的基础上,衍生出多种针对不同发病机理的抗癌药物治疗。但由于大多数抗癌药物在作用于靶细胞时往往涉及正常细胞,且目前临床上用于治疗肿瘤的化学药物都有不同程度的致突变性,因此在治疗肿瘤的同时也增加了病人患第二种肿瘤的可能性,因此目前从天然物质中寻找毒副作用小、安全有效的抗癌药物成为近些年的研究热点。本论文主要针对中草药黄芩中汉黄芩素的提取及其抗肿瘤作用进行研究。本论文从黄芩中提取了汉黄芩素。将黄芩样品粉碎后,使用95%乙醇在索氏提取器中进行回流提取,再用旋转蒸发仪除去溶剂,得到汉黄芩素粗提物。使用制备型HPLC将此粗提物中相应组分合并收集并经过滤后,再次通过制备型HPLC进行进一步的分离纯化,收集目的产物,经结晶后得到汉黄芩素纯品。本论文进而研究了汉黄芩素对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响,探讨其作用机制。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测汉黄芩素对结肠癌HT-29细胞,乳腺癌MCF-7细胞,前列腺癌PC-3细胞和子宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤作用,用流式细胞仪检测MCF-7细胞周期分布及bcl-2、bax蛋白含量,并用相应的检测试剂盒对MCF-7细胞线粒体膜电位和caspase-3的活性进行测定。实验结果表明,汉黄芩素对四种肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用,但对于不同组织来源的细胞其抑制强度不尽相同。40μmol/L汉黄芩素对结肠癌HT-29细胞,乳腺癌MCF-7细胞,前列腺癌PC-3细胞和子宫颈癌HeLa细胞24h的抑制率分别为32.74%,51.42%,44.17%和35.63%,且抑制作用随汉黄芩素浓度的增加和作用时间的延长而增强,呈现明显的剂量和时间依赖关系。其中,汉黄芩素对MCF-7细胞的抑制作用最为显著,20μmol/L汉黄芩素作用MCF-7细胞24h,可使其凋亡率达到33.41%,线粒体膜电位下降56.55%,bcl-2蛋白表达下降16.10%,bax蛋白表达水平提高13.91%,caspase-3活性提高259.62%。总之,汉黄芩素可抑制结肠癌HT-29细胞,乳腺癌MCF-7细胞,前列腺癌PC-3细胞和子宫颈癌HeLa细胞的体外生长,其抗乳腺癌MCF-7细胞的机制主要与影响细胞周期分布、降低线粒体膜电位、促进caspase-3的活化、下调bcl-2和上调bax蛋白的表达有关。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
引言  8
1. 文献综述  8-14
  1.1 汉黄芩素的来源、分布及结构  9-10
    1.1.1 汉黄芩素的来源及分布  9-10
    1.1.2 汉黄芩素的结构  10
  1.2 汉黄芩素的性质和生理功能  10-14
    1.2.1 汉黄芩素的性质  10
    1.2.2 汉黄芩素的生理功能  10-14
      1.2.2.1 汉黄芩素抗菌作用  10
      1.2.2.2 汉黄芩素的消炎作用  10-11
      1.2.2.3 对心血管的防护作用  11
      1.2.2.4 降压、利尿作用  11
      1.2.2.5 利胆、解痉作用  11-12
      1.2.2.6 解热作用  12
      1.2.2.7 抗肿瘤作用  12-14
2. 汉黄芩素体外抗肿瘤作用研究  14-31
  2.1 实验材料与方法  14-18
    2.1.1 实验材料  14-15
      2.1.1.1 试剂  14
      2.1.1.2 细胞株  14
      2.1.1.3 仪器  14-15
    2.1.2 实验方法  15-18
      2.1.2.1 汉黄芩素粗提物的制备  15
      2.1.2.2 汉黄芩素的分离纯化方法  15-16
      2.1.2.3 汉黄芩素的精制  16
      2.1.2.4 汉黄芩素的鉴定  16
      2.1.2.5 细胞培养  16-17
      2.1.2.6 MTT 比色法分析细胞活力  17
      2.1.2.7 PI 染色流式细胞仪检测细胞周期分布  17
      2.1.2.8 线粒体膜电位的测定  17
      2.1.2.9 Caspase-3 的活性测定  17-18
      2.1.2.10 Bcl-2 和Bax 蛋白的测定  18
      2.1.2.11 统计学分析  18
  2.2 结果与分析  18-31
    2.2.1 汉黄芩素分离纯化与鉴定结果  18-21
    2.2.2 MTT 比色法检测的结果  21-24
    2.2.3 PI 染色FCM 检测汉黄芩素对MCF-7 细胞周期分布的影响  24-27
    2.2.4 汉黄芩素对MCF-7 细胞线粒体膜电位的影响  27-28
    2.2.5 汉黄芩素对Caspase-3 活性的影响  28-29
    2.2.6 汉黄芩素对Bcl-2 家族蛋白表达的影响  29-31
3. 结论与展望  31-33
  3.1 本研究结论  31-32
  3.2 本研究有待于深入的内容  32-33
参考文献  33-38
致谢  38-39
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  39

汉黄芩素体外抗乳腺癌作用研究

内容摘要

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