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rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

作　者: 张月
导　师: 孟岩
学　校: 青岛大学
专　业: 眼科学
关键词: 糖尿病视网膜病变重组人促红细胞生成素 M(u ¨)ller细胞细胞凋亡 Bcl-2 Bax
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：探讨重组人促红细胞生成素(Recombinant human erythropoietin, rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Muller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：采用改进的酶消化发培养新生SD大鼠视网膜Muller细胞,取3-4代时培养的细胞行免疫细胞化学染色鉴定。将体外培养大鼠视网膜Muller细胞随机分为高浓度葡萄糖培养组、对照组和各浓度rhEPO处理组,rhEPO处理组在高浓度葡萄糖培养液中分别加入终浓度为5、10、20、40kU/L rhEPO,培养48h后,用MTT法检测视网膜Muller细胞活力,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果：免疫细胞化学染色显示,体外培养的细胞大部分GS染色阳性,该方法培养的大鼠视网膜Muller细胞纯度可达到95%以上。在高浓度葡萄糖条件下,体外培养的视网膜Muller细胞与对照组相比活性下降,且细胞大量凋亡,Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高。各浓度rhEPO组经rhEPO处理后与高浓度葡萄糖组相比细胞活力显著增强,并明显增强了Bcl-2蛋白的表达(P<0.05),降低Bax蛋白的表达(P<0.05)结论：rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Muller细胞的凋亡,并能显著增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Miiller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。

全文目录

中文摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-7
第一章实验材料  7-9
  1.1 实验动物  7
  1.2 主要试剂  7-8
  1.3 主要仪器  8-9
第二章试验方法  9-14
  2.1. SD乳鼠视网膜Muller细胞的纯化培养  9-10
  2.2 SD乳鼠视网膜Muller细胞的观察与鉴定  10-11
  2.3 细胞接种和实验分组  11-12
  2.4 MTT法评价Muller细胞活力  12
  2.5 ELISA方法检测各实验组Bcl-2和Bax的表达  12-13
  2.6 统计学分析  13-14
第三章实验结果  14-21
  3.1 形态学观察大鼠视网膜Muller细胞生长状况  14-17
  3.2 免疫细胞化学法鉴定细胞  17-18
  3.3 高浓度葡萄糖及rhEPO处理对视网膜Muller细胞活力的影响  18-19
  3.4 ELISA检测各实验组Bcl-2和Bax的结果判定  19-21
第四章讨论  21-24
结论  24-25
参考文献  25-28
文献综述  28-36
  参考文献  32-36
附录  36-37
攻读学位期间的研究成果  37-38
致谢  38-39

rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

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