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着丝粒蛋白-E野生型基因沉默对人结肠癌细胞HCT116的生物学作用研究

作　者: 章帆
导　师: 翁亚光
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: RNA干扰 CENP-EWT HCT116细胞结肠癌迁移
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 11次
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内容摘要

目的：利用RNA干扰技术下调着丝粒蛋白E野生型（wild typecentromere protein E,CENP-EWT）基因的表达，观察其对结肠癌 HCT116细胞的生物学作用。方法：将细胞分为以下3组：空白对照组、空载体组、实验组（即转染CENP-EWT shRNA组）。用针对CENP-EWT特异靶点的shRNA转染结肠癌细胞HCT116，运用巢式PCR检测mRNA水平的变化；MTT检测细胞增殖的影响；Hoechst法检测细胞凋亡的变化；Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。设计并合成针对着丝粒蛋白E缺失型（Variant type Centromereprotein E, CENP-E I）基因特异性的6对siRNA干扰序列，将前期实验中能有效干扰着丝粒蛋白E野生型基因的干扰序列同时合成，通过分子克隆技术，分别7对序列克隆入pSES-HUS腺病毒穿梭质粒，构建重组质粒。结果：与空白对照组和空质粒组相比，转染了CENP-EWT shRNA组可有效的抑制CENP-EWT基因的表达(P<0.05)；MTT实验显示：CENP-EWT shRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)；Hoechst实验显示：CENP-EWT shRNA组细胞凋亡比例显著增加(P<0.05)；Transwell实验显示：CENP-EWT shRNA组细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05)。将合成好的5对针对CENP-E I基因的干扰序列和1对针对CENP-EWT基因的干扰序列，成功的克隆入pSES-HUS腺病毒穿梭质粒，并且得到了较好的转染效率及干扰效果。结论：靶向CENP-EWT基因沉默能够抑制人结肠癌细胞HCT116中CENP-EWT基因的表达，抑制细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，但同时能增强细胞的迁移和侵袭能力。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
第一部分 CENP-EWT对HCT116细胞增殖、凋亡、迁移侵袭能力的影响  13-27
  1 材料和方法  13-19
  2 结果  19-24
  3 讨论  24-27
第二部分 CENP-E缺失型干扰质粒的构建  27-38
  1 材料和方法  27-35
  2 结果  35-37
  3 讨论  37-38
全文总结  38-40
参考文献  40-42
文献综述  42-48
  参考文献  45-48
致谢  48-49
攻读研究生期间发表论文  49-50

着丝粒蛋白-E野生型基因沉默对人结肠癌细胞HCT116的生物学作用研究

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