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HSP90抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞株HCT116的作用研究

作　者: 刘覃
导　师: 陈少骥
学　校: 苏州大学
专　业: 普通外科学
关键词: 结肠癌 HCT116细胞株热休克蛋白90 17-DMAG 增殖凋亡
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的研究热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin ,17-DMAG)对结肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法以不同浓度的17-DMAG作用于对数生长期的结肠癌细胞株HCT116,在倒置相差显微镜及共聚焦显微镜下观察细胞凋亡形态学变化;应用MTT比色法检测其吸光度(OD)值,并计算细胞生长抑制率;采用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期变化;通过Annexin V-FITC和PI双染法检测各组细胞凋亡率的变化;Western Blot法检测Akt、Survivin蛋白含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中Akt、Survivin mRNA的表达水平。结果17-DMAG作用后的HCT116细胞在倒置相差显微镜下可见体积变小、不规则,细胞密度降低;随着药物浓度的加大,细胞数量明显减少。共聚焦显微镜下观察AO/EB染色后的药物处理组细胞出现核染色质固缩浓集的凋亡表现。MTT法显示17-DMAG能抑制结肠癌细胞株HCT116的生长增殖,并呈时间、剂量依赖性(P<0.05)。流式细胞仪细胞周期分析显示,经17-DMAG处理过的不同浓度的细胞组之间、以及处理组与对照组之间相比,在G2-M期或者G1-S期没有明显的细胞比例增加。Annexin V-FITC和PI双染检测结果显示17-DMAG浓度为1.0、2.5、5.0μmol/L的细胞凋亡率分别为6.0%、13.6%、40.4%,与对照组(1.6%)相比有显著性差异(P<0.05)。应用Western Blot检测,结果显示经不同浓度的17-DMAG作用于结肠癌HCT116细胞48小时可以使细胞中Akt、Survivin蛋白表达下降(P<0.05)。半定量RT-PCR检测结果显示,随着17-DMAG浓度的增大,Akt mRNA和Survivin mRNA的表达水平呈剂量依赖性降低。结论HSP90抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞株HCT116的生长增殖有明显的抑制作用,并呈时间、剂量依赖性,并诱导其凋亡。17-DMAG引起HCT116细胞凋亡的机制可能与降低Akt蛋白及Survivin蛋白含量有关。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-11
材料与方法  11-19
结果  19-27
讨论  27-33
结论  33-34
参考文献  34-38
综述：肿瘤治疗的分子靶点HSP90 的研究进展  38-49
  参考文献  45-49
攻读学位期间公开发表的论文  49-50
中英文对照缩略词表  50-51
致谢  51-52

HSP90抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞株HCT116的作用研究

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