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丹皮酚对肺腺癌放射增敏作用及其机制的体内外实验研究

作　者: 雷宇
导　师: 孙国平
学　校: 安徽医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 放射增敏 丹皮酚 动物模型 肺腺癌细胞系 A549 LLC 细胞周期 细胞凋亡 COX-2 Survivin
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


背景：肺癌是我国常见的呼吸系统恶性肿瘤。肺癌由于其起病隐匿，进展迅速，预后较差，已经严重的危害到人类的健康。放射治疗是肺癌局部治疗中的一个重要手段。在肺癌的放射治疗中，鳞状细胞癌对射线较为敏感，而腺癌较抗拒，如何能提高射线对肺腺癌细胞的杀伤作用、增强肺腺癌的放疗疗效，越来越多的被重视起来。本课题组前期的研究中发现：天然活性物质丹皮酚，能够抑制多种肿瘤细胞的生长，并诱导其凋亡。同时能够下调肿瘤组织中的COX-2和Survivin蛋白表达。而这些因子又与细胞的放射敏感性有着密切的关系。本实验主要探索丹皮酚能否通过这些途径在体内和体外影响肿瘤细胞和组织的放射敏感性，并希望为肺癌的放射治疗寻找新的突破。目的：丹皮酚对人肺腺癌细胞系A549和小鼠Lewis肺癌细胞LLC的放射增敏作用并初步了解其机制。方法：1.MTT法测定丹皮酚对A549和Lewis肺癌细胞抑制作用，计算半数抑制率（IC50），确定无毒剂量范围；2.克隆形成试验检测丹皮酚对A549和Lewis肺癌细胞放射敏感性的影响；3.TUNEL染色法检测丹皮酚和射线对A549细胞凋亡的影响；4.流式细胞术分析不同时间点下不同浓度的丹皮酚和射线对A549细胞凋亡和周期的影响；5.Western blot检测丹皮酚和射线对A549细胞COX-2和Survivin表达的影响；6.动物饲养与小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的制作；7.丹皮酚对小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的增敏效果。结果：1.丹皮酚浓度在7.81、15.63、31.25、62.5、125、250mg/L时，对体外培养的人肺腺癌细胞系A549和小鼠Lewis肺癌细胞LLC均有抑制作用，半数抑制率IC50分别为25.2和31.1mg/L；2.预先用无毒剂量附近的丹皮酚处理细胞24h后再行照射，细胞存活曲线“肩部”变窄，曲线下移。提示其能提高A549和Lewis肺癌细胞的放射敏感性，最高增敏比分别可达1.31和1.23；3. TUNEL染色法检测到丹皮酚能增加辐射诱导的细胞凋亡率；4.流式细胞仪检测发现丹皮酚增加辐射诱导细胞凋亡作用具有时间依赖性和剂量依赖性，而对细胞周期未见明显影响；5.丹皮酚能下调人肺腺癌细胞A549中COX-2和Survivin蛋白的表达，与射线联合后，丹皮酚同样能发挥抑制此两种蛋白表达的作用；6.在单次10Gy放疗前30分钟通过灌胃给予丹皮酚，可以显著抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤模型肿瘤的生长，抑制率可达62.1%。结论：丹皮酚对体外培养的人肺腺癌细胞系A549和小鼠Lewis肺癌细胞LLC均能发挥增敏效果，与放射线联合作用后，显著延长小鼠Lewis肺癌移植瘤模型肿瘤的生长时间。推测其机制可能与增加辐射所诱导的细胞凋亡、抑制放射损伤的修复以及下调细胞内COX-2和Survivin两种蛋白的表达有关。

全文目录


英文缩略词  5-7
摘要  7-9
Abstract  9-12
前言  12-15
1 实验材料  15-18
  1.1 细胞株  15
  1.2 动物  15
  1.3 药物及试剂  15-16
  1.4 仪器与设备  16-17
  1.5 主要溶液和试剂配制  17-18
2 实验方法  18-25
  2.1 细胞培养  18-19
  2.2 MTT 法测定丹皮酚对人肺腺癌 A549 和小鼠 Lewis 肺癌细胞 LLC 的增殖抑制作用19  19-20
  2.3 克隆形成试验检测丹皮酚对人肺腺癌 A549 和小鼠 Lewis 肺癌细胞 LLC 的放射增敏作用  20
  2.4 TUNEL 染色法检测丹皮酚和射线对人肺腺癌 A549 细胞凋亡的影响  20-21
  2.5 流式细胞术分析不同时间点下不同浓度的丹皮酚和射线对 A549 细胞凋亡和周期影响  21-22
  2.6 Western blot 检测丹皮酚和射线对人肺腺癌 A549 细胞 COX-2 和 Survivin 表达的影响22  22-23
  2.7 动物饲养与模型的制作  23-24
  2.8 丹皮酚对小鼠 Lewis 肺癌移植瘤模型的增敏作用  24-25
  2.9 统计方法  25
3．实验结果  25-42
  3.1 丹皮酚对人肺腺癌 A549 和小鼠 Lewis 肺癌细胞 LLC 的增殖抑制作用  25-28
  3.2 丹皮酚对人肺腺癌 A549 和小鼠 Lewis 肺癌细胞 LLC 的放射增敏作用  28-31
  3.3 TUNEL 染色法检测丹皮酚和射线对人肺腺癌 A549 细胞凋亡的影响  31-33
  3.4 流式细胞术分析不同时间点下不同浓度的丹皮酚和射线对人肺腺癌 A549 细胞凋亡和周期的影响  33-35
  3.5 丹皮酚和射线对人肺腺癌 A549 细胞 COX-2 和 Survivin 表达的影响  35-37
  3.6 丹皮酚对小鼠 Lewis 肺癌移植瘤模型的增敏作用  37-42
4.讨论  42-47
  4.1 丹皮酚对体外培养的肿瘤细胞具有增殖抑制作用  43
  4.2 丹皮酚增加体外培养的肿瘤细胞的放射敏感性与抑制小鼠移植瘤模型的肿瘤生长  43-44
  4.3 丹皮酚的放射增敏作用的机制  44-47
5.结论  47-48
参考文献  48-54
附录  54-55
致谢  55-56
综述：天然放射增敏剂的研究进展  56-68
  参考文献  63-68

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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