学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

肾虚质大鼠免疫基因表达与肾藏象理论相关性研究

作　者: 党照丽
导　师: 孙理军
学　校: 陕西中医学院
专　业: 中医基础理论
关键词: 肾藏象理论 肾虚质 恐伤肾 免疫 免疫相关差异表达基因
分类号: R229
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 63次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的本课题根据肾虚质的生理病理特点，从差异性角度研究肾藏象理论，在前期研究的基础上，继续完善具有中医体质理论特色的肾虚质大鼠造模方法；筛选肾虚质大鼠的特异性免疫分子标志物，以及免疫相关差异表达基因，深入探讨肾虚质与免疫的相关性，以及改善肾虚质的有效药物，为肾藏象理论的现代研究提供新的思路与方法，以期丰富和发展肾藏象理论。方法以中医“恐伤肾”理论为指导，采用“猫吓鼠”的方法，先造成母鼠肾精受损，子鼠先天不足，再对先天不足的子鼠进行惊吓，造成先天不足、后天失养的复合型肾虚质动物模型，并选用桂附地黄丸（0.9375g/kg）对肾虚质动物进行调理。采用ELISA法检测大鼠血清IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α含量的变化，运用流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分率及CD4+/CD8+比值的变化，应用基因芯片技术比较分析肾虚质大鼠与正常质大鼠及补肾药物干预后的肾虚质大鼠脾脏淋巴细胞免疫相关差异表达基因谱。结果1外周血清细胞因子含量的检测：与空白组比较，模型组IL-2、IL-10、IFN-γ的含量均降低，IL-6、TNF-α的含量升高，其中IL-2、IFN-γ的降低和TNF-α的升高有统计学意义（p＜0.05）；与模型组比较，药物组IL-2、IL-10、IFN-γ的含量均升高，IL-6，TNF-α的含量降低。2脾脏T淋巴细胞亚群的检测：与空白组相比，模型组CD3+、CD4+百分率下降，CD8+百分率升高，CD4+/CD8+比值小于1.0，其中CD4+百分率、CD4+/CD8+比值降低有统计学意义（p＜0.05）；与模型组比，药物组CD3+、CD4+百分率升高，CD8+百分率降低，CD4+/CD8+比值大于1.0。3免疫相关差异表达基因的筛选：模型组与空白组大鼠脾脏淋巴细胞mRNA杂交得到了149条差异表达基因，其中免疫相关的基因77条；药物干预后与模型组杂交得到了45条差异表达基因，其中免疫相关的基因有26条。通过对以上免疫相关的基因的统计分析，发现有12条基因在两次杂交中均有差异，其中有5条基因在模型组表达上调，经药物干预后表达下调；有7条基因在模型组表达下调，经药物干预后表达上调。结论本实验建立的先天不足+后天惊恐之复合型肾虚质动物模型，具有中医体质理论特色和操作的可行性，符合肾虚质形成的多因素特点；肾虚质大鼠存在着免疫稳态失衡，外周血清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α的含量变化与肾虚质有一定的相关性，脾脏T淋巴细胞亚群中CD3+、CD4+、CD8+百分率及CD4+/CD8+比值的变化可能是判断肾虚质的客观指标，在两次杂交中均有差异的12条基因可能是与肾虚质直接相关的免疫基因，桂附地黄丸可以通过调节CD4+/CD8+的比值和免疫基因的表达来改善肾虚质大鼠的免疫功能。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-11
第一部分 实验研究  11-28
  实验一 肾虚质大鼠特异性免疫分子标志物的筛选  11-14
    1 实验材料  11-12
      1.1 实验动物  11
      1.2 实验药物及试剂  11
      1.3 实验仪器及耗材  11-12
    2 实验方法  12-13
      2.1 模型建立  12
      2.2 给药方法  12
      2.3 标本采集与处理  12
      2.4 指标检测  12-13
      2.5 数据处理  13
    3 结果  13-14
      3.1 各组大鼠一般状况比较  13
      3.2 各组大鼠血清 IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α的比较  13-14
      3.3 各组大鼠脾脏 T 淋巴细胞亚群变化的比较  14
  实验二 肾虚质大鼠免疫相关差异表达基因的筛选  14-28
    1 动物模型制备  14
    2 实验过程  14-20
      2.1 脾脏淋巴细胞的提取及分离  14-15
      2.2 脾脏淋巴细胞总 RNA 的鉴定  15-17
      2.3 脾脏淋巴细胞总 RNA 的提取  17
      2.4 样品线性扩增  17-18
      2.5 芯片杂交  18-20
      2.6 芯片扫描和数据分析  20
    3 结果  20-28
      3.1 总 RNA 的定量、定性分析  20
      3.2 芯片扫描结果  20-22
      3.3 免疫相关差异表达基因的筛选结果  22-28
第二部分 理论探讨  28-39
  1 肾虚质与肾藏象理论的相关性  28-32
    1.1 肾藏象理论概述  28-30
    1.2 肾虚质概述  30-32
    1.3 肾虚质与肾藏象的相关性  32
  2 肾虚质实验动物模型的建立  32-34
  3 肾虚质与免疫的相关性  34-36
  4 肾虚质与免疫基因的相关性  36-39
第三部分 讨论  39-46
  1 对肾虚质大鼠造模方法的评价  39-40
  2 相关指标的选取及意义  40-44
    2.1 检测细胞因子的意义  40-41
    2.2 检测 T 淋巴细胞亚群变化的意义  41-42
    2.3 筛选免疫相关差异表达基因的意义  42-44
  3 存在的问题及展望  44-46
结语  46-48
参考文献  48-52
附录  52-53
致谢  53

相似论文

  1. 苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究,S661.1
  2. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  3. 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
  4. 微纤维相关蛋白4在肝纤维化组织中的表达和外周血浓度与肝病理分级的相关性研究,R575.2
  5. 携带WSSV凡纳滨对虾的养殖和环境因子胁迫的研究,S945
  6. 调和玉米油对肉仔鸡抗氧化应激、脂质代谢酶及免疫基因表达的影响,S831.5
  7. 羊种布鲁氏菌16M优势蛋白抗原的鉴定,S852.61
  8. “和美酵素”在断奶仔猪生产中的应用研究,S828.9
  9. PRRSV的感染差异性和抗体依赖性增强作用研究,S858.28
  10. 维生素E和C对军曹鱼（Rachycentron canadum）生长性能和非特异性免疫的影响,S963.1
  11. 添加钾离子对低盐度水体养殖凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的生长与生理特性的影响,S963
  12. 几种免疫增强剂对军曹鱼（Rachycentron canadum）生长、非特异免疫力和抗病力的影响,S963
  13. 免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒融合蛋白方法的建立,R373
  14. 棘胸蛙非特异性免疫在多种环境胁迫下的反应特征,Q958.1
  15. 大豆细菌性斑点病原物的分离鉴定及其两个Ⅲ型效应因子的克隆与功能研究,S435.651
  16. 传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2基因在家蚕中的表达及亚单位疫苗的初步研究,S855.3
  17. MMP-7和溶菌酶在DSS诱导的Balb/c小鼠溃疡性结肠炎模型发病机制中的作用,S858.91
  18. 华东地区鸭圆环病毒感染流行病学调查及其单克隆抗体的制备,S858.32
  19. Kisspeptin/GPR54系统在下丘脑—垂体—卵巢轴对蛋鸡生殖调控的研究,S831
  20. 固始鸡胚期消化管发育的研究,S831
  21. 几种非常规蛋白饲料发酵条件优化及其在肉仔鸡中的应用研究,S831.5

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医基础理论 > 其他
© 2012 www.xueweilunwen.com