学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

高表达Omi/HtrA2并siRNA沉默PED/PEA-15基因对前列腺癌生物学行为的影响

作　者: 胡晓勇
导　师: 陈晓春
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: Omi/HtrA2 PED/PEA-15 siRNA 前列腺癌 细胞凋亡
分类号: R737.25
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
下　载: 172次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


一、PED/PEA-15在前列腺癌中的表达及意义目的检测PED/PEA-15在人前列腺癌组织和细胞(PC-3)中的表达,探讨PED/PEA-15在前列腺癌中表达的意义。方法应用免疫组化SP法检测前列腺癌和正常前列腺组织中PED/PEA-15的表达;用RT-PCR法检测PC-3细胞中PED/PEA-15的表达。结果免疫组化和RT-PCR均显示PED/PEA-15在前列腺癌中高表达;正常前列腺组织没有或只有少量很弱的表达。结论抗凋亡因子PED/PEA-15的表达对前列腺癌的发展有重要作用。二、PED/PEA-15真核表达载体的构建及对前列腺癌细胞凋亡的影响目的构建PED/PEA-15真核表达载体,探讨PED/PEA-15对PC-3细胞凋亡的影响。方法用RT-PCR法从PC-3中扩增出PED/PEA-15全长基因,以pEGFP-N1为载体构建其真核表达质粒。以脂质体法转染PED/PEA-15真核表达载体至前列腺癌细胞(PC-3)中,用流式细胞和MTT法检测PED/PEA-15对PC-3细胞凋亡和生长的影响。结果酶切和DNA测序证实PED/PEA-15的真核表达载体构建成功。转染PED/PEA-15真核载体的PC-3细胞凋亡下调,且对肿瘤杀伤因子KillerTRAIL的敏感性亦下降。结论抗凋亡因子PED/PEA-15可阻抑前列腺癌细胞(PC-3)的凋亡,PED/PEA-15的表达对前列腺癌的发展有重要作用。三、siRNA沉默PED/PEA-15对前列腺癌细胞凋亡的影响目的通过构建PED/PEA-15特异的siRNA载体,探讨PED/PEA-15对前列腺癌细胞(PC-3)凋亡的影响。方法利用Invivogen公司的软件辅助设计PED/PEA-15特异性siRNA序列并体外合成后,克隆入真核表达载体psiRNA-hH1neo。以脂质体法转染psiRNA-PED/PEA-15至PC-3细胞中,以RT-PCR和Western blot法检测psiRNA-PED/PEA-15对PED/PEA-15表达的影响;用MTT和流式细胞法检测其对PC-3细胞凋亡的影响。结果酶切和DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确,并已被准确克隆入psiRNA-hH1neo载体。psiRNA-PED/PEA-15可特异性抑制PC-3细胞中PED/PEA-15的表达。转染psiRNA-PED/PEA-15的PC-3细胞凋亡显著增加(P<0.05)结论PED/PEA-15可阻抑前列腺癌细胞凋亡,PED/PEA-15的表达对前列腺癌的发展有重要作用。四、抗凋亡因子XIAP和PED/PEA-15在前列腺癌(PC-3)中的表达及对细胞凋亡的影响目的检测抗凋亡因子XIAP与PED/PEA-15在前列腺癌细胞(PC-3)中的表达,探讨二者对前列腺癌细胞凋亡的影响。方法应用半定量RT-PCR法检测前列腺癌细胞(PC-3)中PED/PEA-15和XIAP的表达。设计并构建PED/PEA-15和XIAP特异的siRNA载体,以脂质体法转染二者的siRNA载体至前列腺癌细胞(PC-3)中,半定量RT-PCR法检测特异siRNA载体对PED/PEA-15和XIAP转录的影响;光镜观察细胞形态改变;流式细胞法检测细胞凋亡的变化。结果半定量RT-PCR显示PED/PEA-15和XIAP均在前列腺癌细胞(PC-3)中高表达。酶切和DNA测序证实XIAP和PED/PEA-15的siRNA载体构建成功。共转染XIAP和PED/PEA-15的siRNA载体入PC-3细胞,可导致XIAP和PED/PEA-15的转录抑制,并增加PC-3细胞对阿霉素的敏感性凋亡亦明显增加,处理组凋亡率为79%对照组为46%(p<0.05)。结论PED/PEA-15和XIAP在前列腺癌细胞的凋亡中有重要作用。六、Omi/HtrA2促前列腺癌细胞(PC-3M)凋亡的实验研究目的检测人前列腺癌细胞(PC-3M)中Omi/HtrA2的表达情况,并构建其小干扰RNA (siRNA)表达载体,探讨Omi/HtrA2对PC-3M凋亡的影响。方法以细胞免疫组化和RT-PCR法检测Omi/HtrA2在前列腺癌细胞系(PC-3M)和正常前列腺细胞中的表达。利用Invivogen公司的软件辅助设计Omi/HtrA2特异性siRNA序列,体外合成后将其克隆入真核表达载体psiRNA- hH1neo。以脂质体法转染psiRNA-Omi/HtrA2载体至PC-3M中,以RT-PCR和Western blot法检测psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2转录和表达的沉默效应。用MTT和流式细胞法检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后,PC-3M细胞凋亡的变化。结果细胞免疫组化和RT-PCR均显示Omi/HtrA2在PC-3M细胞中高表达。酶切和DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确,并已被准确克隆入psiRNA-hH1neo载体中。psiRNA-Omi/HtrA2载体可特异性抑制PC-3M细胞中Omi/HtrA2的表达。转染psiRNA-Omi/HtrA2载体的PC-3M细胞凋亡下调。结论促凋亡因子Omi/HtrA2可导致前列腺癌细胞凋亡,Omi/HtrA2的表达对前列腺癌的发展有重要作用。七、Omi/HtrA2抑制PED/PEA-15促前列腺癌细胞(PC-3)凋亡的研究背景与目的促、抑凋亡因子间的相互作用与肿瘤的发生、发展密切相关,Omi/HtrA2是新近发现的一种凋亡调节因子,PED/PEA-15是一种广泛表达的抗凋亡蛋白,本研究旨在探讨Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和前列腺癌细胞(PC-3)凋亡的影响。方法构建Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体,并用脂质体法将二载体分别转染至PC-3细胞中,Western blot和ELISA法检测Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和细胞凋亡的影响;caspase-8检测试剂盒检测PED/PEA-15对caspase-8活性的影响;Western blot、RT-PCR检测Omi/HtrA2特异siRNA序列对其转录、翻译的影响,流式细胞法检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后,PC-3细胞凋亡的变化。结果酶切和DNA测序证实Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体构建成功。通过转染Omi/HtrA2表达载体高表达Omi/HtrA2可抑制PED/PEA-15表达,并增加肿瘤细胞的凋亡率;抑制PED/PEA-15的表达可提高caspase-8活性。siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后PC-3细胞对顺铂的敏感性降低。结论Omi/HtrA2可通过抑制抗凋亡蛋白PED/PEA-15表达而在PC细胞凋亡中发挥重要作用。八、高表达Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达缺陷的前列腺癌细胞凋亡的影响目的探讨Omi/HtrA2促前列腺癌细胞凋亡机制,找寻前列腺癌治疗新方法。方法分别构建促凋亡因子Omi/HtrA2的真核表达载体、抗凋亡蛋白PED/PEA-15的特异siRNA载体。用脂质体法将PED/PEA-15的siRNA载体转染入前列腺癌细胞(PC-3)中,经G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,RT-PCR、Western blot法对亚克隆细胞株进行PED/PEA-15基因鉴定。将Omi/HtrA2表达载体转染入亚克隆细胞株,流式细胞仪检测高表达Omi/HtrA2对亚克隆细胞株凋亡的影响。结果酶切和DNA测序证实Omi/HtrA2表达载体和PED/PEA-15特异siRNA载体构建成功。G418筛选出的亚克隆细胞株中PED/PEA-15的表达极弱。在亚克隆细胞株中高表达Omi/HtrA2细胞凋亡率较高、XIAP的抑制亦更明显。结论抗凋亡蛋白PED/PEA-15的表达可阻抑Omi/HtrA2促前列腺癌细胞凋亡之作用。

全文目录


前言  5-10
中文摘要  10-13
英文摘要  13-18
第一部分 PED/PEA-15 在前列腺癌中的表达及对细胞凋亡的影响  18-47
  第一节 PED/PEA-15 在前列腺癌中的表达及意义  18-23
    材料与方法  18-19
    结果  19-21
    讨论  21-22
    参考文献  22-23
  第二节 PED/PEA-15 真核表达载体的构建及对前列腺癌细胞凋亡的影响  23-30
    材料与方法  23-25
    结果  25-27
    讨论  27-29
    参考文献  29-30
  第三节 siRNA 沉默PED/PEA-15 对前列腺癌细胞凋亡的影响  30-38
    材料与方法  30-32
    结果  32-35
    讨论  35-37
    参考文献  37-38
  第四节 抗凋亡因子XIAP 和PED /PEA-15 在前列腺癌(PC-3)中的表达及对细胞凋亡的影响  38-47
    材料和方法  38-41
    结果  41-44
    讨论  44-46
    参考文献  46-47
第二部分 Omi/HtrA2 在前列腺癌中的表达及对细胞凋亡的影响  47-78
  第一节 Omi/HtrA2 在前列腺癌和前列腺增生中的表达及意义  47-56
    1 MATERIALS AND METHODS  47-49
    2 RESULTS  49-53
    3 DISCUSSION  53-55
    REFERENCES  55-56
  第二节 Omi/HtrA2 促前列腺癌细胞（PC-3M）凋亡的实验研究  56-66
    材料和方法  56-59
    结果  59-63
    讨论  63-65
    参考文献  65-66
  第三节 Omi/HtrA2 抑制 PED/PEA-15 促前列腺癌细胞(PC-3)凋亡的研究  66-78
    材料和方法  66-69
    结果  69-75
    讨论  75-76
    参考文献  76-78
第三部分 高表达Omi/HtrA2 对 PED/PEA-15 表达缺陷前列腺癌细胞凋亡的影响  78-87
  材料和方法  78-81
  结果  81-84
  讨论  84-86
  参考文献  86-87
综述  87-97
致谢  97-98
附录一  98-99
附录二  99-100

相似论文

  1. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  2. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  3. 沙利度胺衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究,R965
  4. 醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究,X174
  5. 地克珠利对柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子甘油醛-3-磷酸脱氢酶的影响,S858.31
  6. PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞钙信号的影响及其机理初探,S858.28
  7. β-catenin在猪卵巢组织中的表达以及对猪卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇生成酶的影响,S828
  8. 伏马菌素B1和黄曲霉毒素B1联合诱导Vero细胞凋亡的研究,S856.9
  9. 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
  10. 沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡及BMP通路相关基因表达的影响,S828
  11. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对鸡软骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,S858.31
  12. Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,S865.13
  13. 骨髓间充质干细胞预移植1周对大鼠心肌缺血再灌损伤的修复作用,R542.22
  14. 18氟—氟代脱氧葡萄糖诱导Eca-109食管癌细胞凋亡的初步研究,R735.1
  15. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导仓鼠肾细胞凋亡信号转导机制的研究,S856.9
  16. MRS联合DWI对前列腺癌的诊断价值,R737.25
  17. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导人结肠癌细胞凋亡线粒体信号转导机制的研究,R735.35
  18. 磷脂酶C和D在木聚糖酶诱导的水稻悬浮细胞抗病反应中的作用,S511
  19. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
  20. 榄香烯对人肝癌HepG-2细胞拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ的影响,R735.7
  21. sCD40L对白血病HL-60细胞株生物学行为的影响及机制,R733.7

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 男性生殖器肿瘤 > 前列腺肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com