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噬菌体肽库展示技术在肿瘤逃逸相关CD59基因活性位点的筛选及构建中的应用研究

作　者: 程颖
导　师: 高美华
学　校: 青岛大学
专　业: 病原生物学
关键词: 人CD59 肿瘤逃逸噬菌体肽库短肽封条凋亡
分类号: R73-3
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：利用噬菌体随机十二肽库筛选出能够和人CD59及其单克隆抗体分别特异性结合的短肽序列，找出与人CD59分子特异结合的配体蛋白质及分析这些蛋白质的同源序列，设计具有拮抗人CD59肿瘤逃逸活性的短肤封条，为研究通过封闭人CD59肿瘤逃逸位点以提高肿瘤靶向药物的生物学疗效奠定理论基础。方法：用噬菌体随机十二肽库对体外培养的高表达人CD59的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)和人CD59单克隆抗体进行筛选，并分别随机挑选筛选后的噬菌体单克隆进行测序，并进行与野生型噬菌体的竞争结合实验。在测序结果中找出并分析出现频率高的短肽序列以设计短肽封条，利用透射电镜和免疫组织化学技术观察该封条对人CD59在肿瘤细胞凋亡方面的作用的影响。结果：经过筛选后，各部分噬菌体库的回收量均达到较高的数量级和明显的结合特异性。测序结果显示3个序列均与已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性(H×A××××××P××)。电镜和免疫组化实验显示，据此设计的短肽封条可显著减弱人CD59对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。结论：利用噬菌体肽库对高表达人CD59的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)和人CD59单克隆抗体进行筛选可得到与人CD59特异性结合的短肽序列，据此设计的短肽封条可有效减弱人CD59对肿瘤细胞凋亡的抑制作用，从而为提高肿瘤靶向药物的生物学疗效奠定理论基础。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-5
前言  5-16
  一肿瘤生物治疗的新思路  5-6
  二噬菌体随机肽库展示技术  6-16
材料和方法  16-31
  一材料  16-22
  二方法  22-31
结果  31-53
  一噬菌体肽库筛选高表达人CD59的CHO细胞后的结果及分析  31-35
  二噬菌体肽库筛选人CD59的单克隆抗体的结果及分析  35-37
  三测序结果及分析  37-40
  四短肽封条生物学功能检测  40-53
讨论  53-62
结论  62-63
参考文献  63-67
附录  67-77
综述  77-106
博士研究生期间第一作者发表的文章  106-107
致谢  107-108

噬菌体肽库展示技术在肿瘤逃逸相关CD59基因活性位点的筛选及构建中的应用研究

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