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人bit1基因功能的初步研究

作　者: 滑玮
导　师: 辛晓燕
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 人bit1基因 凋亡 组织芯片 酵母双杂交 功能研究
分类号: R346
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


bitl基因是2004年研究整合素对Bcl-2的表达调控时发现的一个新基因，因其具有下调Bcl-2表达的功能而命名为bitl(bcl-2 inhibitor of transcription 1)。后来的基因组研究表明，从细菌到人类Bitl在进化上是高度保守的。在人体组织内，Bitl在睾丸、前列腺、骨骼肌及肝脏高表达，在心脏、脾、胎盘及结肠有表达，人胸腺及外周血白细胞中几乎检测不到它的表达。Bitl蛋白定位于线粒体内膜；胞浆内Bitl浓度的升高可以明显促进细胞凋亡的发生，而其浓度的降低可以减少细胞凋亡的发生。也就是说，Bitl蛋白是一种与细胞凋亡密切相关的新分子，因此，研究这种具有促凋亡作用的线粒体蛋白对于探索凋亡的发生和调节具有重要意义。本研究旨在观察该蛋白在人妇科肿瘤细胞中的分布及生物学作用，并初步探讨其作用机制，以期为妇科肿瘤的治疗提供一些新的思路。 本课题研究可以分为以下三个部分： (一) 应用组织芯片技术分析Bitl在妇科肿瘤中的分布 方法：应用组织芯片技术，通过免疫组织化学方法比较84例宫颈癌标本和76例正常宫颈组织标本中Bitl的表达情况，以及82例卵巢癌标本和78例正常卵巢组织标本中Bitl的表达情况。 结果：经过统计学分析，发现Bitl在宫颈癌和正常宫颈组织中的表达无显著性差异，在不同的宫颈癌病理分级中也无显著的统计学差异；而Bitl在卵巢癌组织中的表达却显著高于正常卵巢组织，并且随着病理分级的增加，Bitl的表达水平显著降低。鉴于这种差异表达，我们选取卵巢癌作为研究模型。 (二) 观察人Bitl蛋白促卵巢癌细胞凋亡的作用 方法：首先构建pCMV-Mye-bitl和pCMV-Mye-EGFP真核表达载体，

全文目录


缩略语表  6-8
中文摘要  8-11
英文摘要  11-15
前言  15-16
文献回顾  16-53
  一 细胞凋亡与bitl基因  16-34
    1．凋亡途径  17-20
    2．Bcl-2家族与凋亡调节  20-22
    3．失巢凋亡  22-27
    4．Bitl分子的发现及其促凋亡作用  27-34
  二 组织芯片技术简介  34-40
  三 酵母双杂交技术简介  40-53
正文  53-125
  第一部分 应用组织芯片技术分析人Bitl在妇科肿瘤中的分布  53-62
  第二部分 人Bitl蛋白促卵巢癌细胞凋亡作用的研究  62-90
    实验一 pCMV-Myc-bitl真核表达载体的构建  65-69
    实验二 pCMV-Myc-EGFP真核表达载体的构建  69-73
    实验三 人卵巢癌细胞Caov-3内源性bitl表达的鉴定  73-77
    实验四 人卵巢癌细胞Caov-3转染条件的优化  77-79
    实验五 bitl基因在转染细胞中的表达检测  79-81
    实验六 转染bitl基因的人卵巢癌细胞Caov-3的生物学特性检测  81-88
    讨论  88-90
  第三部分 应用酵母双杂交方法筛选人Bitl蛋白作用分子的研究  90-125
    实验一 酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定  90-97
    实验二 人bitl基因做为诱饵对报告基因激活作用的检测  97-101
    实验三 MATCHMAKER GAL4 cDNA文库质粒的准备  101-105
    实验四 酵母双杂交筛选人Bitl结合蛋白  105-114
    实验五 人Bitl候选结合蛋白的验证  114-121
    讨论  121-125
全文总结  125-126
个人简历和研究成果  126-127
致谢  127

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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