学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

线粒体琥珀酸脱氢酶复合物在结直肠癌中的表达及临床意义

作　者: 张德才
导　师: 沈守荣
学　校: 中南大学
专　业: 消化内科学
关键词: SDH 结直肠癌组织芯片生存分析
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 68次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

研究背景与目的：结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤。迄今为止,结直肠癌的发病机制仍不十分清楚。早在1931年,Otto Warburg就发现肿瘤细胞中糖酵解增强,有氧氧化减弱。近年来,能量代谢紊乱在肿瘤发生与演进中的作用及机制逐渐受到人们的重视。近几年研究发现琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)是核基因编码的线粒体抑瘤基因,对研究糖酵解增强的触发因素提供了重要线索,并首次将线粒体酶功能紊乱同肿瘤形成联系起来。研究表明,由于SDH的失活,线粒体内积聚的琥珀酸渗漏到胞浆中,进而抑制了脯氨酰羟化酶。脯氨酰羟化酶的抑制导致了肿瘤细胞对某些凋亡信号产生抵抗和／或激活缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)从而促进了肿瘤生成与发展。国内外至今尚未见SDH在结直肠癌中的发生和演进中所起作用的相关文献。本课题旨在通过研究SDH复合物在结直肠癌组织中的表达情况,并分析SDH的表达与HIF-1α以及与肿瘤临床病理特征、病人预后的关系,为下一步研究SDH在结直肠癌中的作用机制奠定基础。方法：本研究采用336个点阵的结直肠组织芯片,利用免疫组化技术检测SDH四个亚基(SDHA、SDHB、SDHC、SDHD)蛋白表达,并进一步分析蛋白表达与结直肠组织临床病理特征及病人预后的关系。同时抽提了三株结肠癌细胞以及不同分化阶段结直肠癌组织的蛋白通过Western blot检测SDHB与HIF-1α的表达情况。结果：(1)SDHB蛋白在结直肠癌组织较正常结直肠粘膜的表达明显下调,而SDHA、SDHC、SDHD在结直肠癌组织和正常粘稠的表达无明显差异。SDHB在结直肠癌组织的阳性表达与分化程度相关,在低分化结直肠癌组织中表达较中、高分化明显减弱。Western blot检测亦发现SDHB在低分化结直肠癌组织中表达明显减弱。(2)Western blot检测发现不同分化程度的结直肠癌组织和结直肠正常粘膜不表达活化的HIF-1α;此外在常氧状态下培养的SW480、SW620及HT-29三株结肠癌细胞中,只有HT-29细胞株表达SDHB蛋白,而三株细胞均未表达有活性的HIF-1α;通过氯化钴诱导HT-29细胞化学缺氧后,Western blot检测到有活性的HIF-1α蛋白表达。(3)年龄、Dukes分期、有无淋巴结转移及有无远处转移这四项临床病理参数与结直肠癌患者预后相关,而现有数据尚不能证明SDHB的表达与结直肠癌患者的预后存在相关性。结论：(1)本实验首次研究了SDH四个亚基在结直肠组织中的表达水平：SDHA、SDHC与SDHD在结直肠正常粘膜和结直肠癌组织中高表达,正常粘膜与癌组织中的表达无显著性差异；SDHB在癌组织中表达下调,且SDHB蛋白表达与结直肠癌组织分化程度相关,在低分化癌组织中表达较中、高分化癌组织明显减弱。现有数据尚不能证明SDHB的表达与结直肠癌患者的预后存在相关性。(2)影响结直肠癌患者预后的因素有年龄、Dukes分期、有无淋巴结转移及有无远处转移。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
缩写词简表  12-13
前言  13-15
技术路线  15-16
第一章材料与方法  16-23
  1. 材料  16-19
    1.1 组织芯片及随访资料  16
    1.2 结直肠癌组织标本  16
    1.3 细胞  16-17
    1.4 主要试剂  17-18
    1.5 其它材料  18
    1.6 主要仪器  18-19
  2. 方法  19-23
    2.1 免疫组化  19-20
    2.2 制备用于Western blot的蛋白质  20-21
    2.3 蛋白免疫印迹(Western blot)验证蛋白表达  21-22
    2.4 HT-29细胞的缺氧处理  22
    2.5 生存分析统计学处理  22-23
第二章结果  23-36
  1. 免疫组织化学法检测SDH在结直肠组织芯片中的表达  23-28
    1.1 SDHA蛋白在结直肠癌和癌旁粘膜中的表达  23-24
    1.2 SDHB蛋白在结直肠癌和癌旁粘膜中的表达  24-26
    1.3 SDHC蛋白在结直肠癌和癌旁粘膜中的表达  26-27
    1.4 SDHD蛋白在结直肠癌和癌旁粘膜中的表达  27-28
    1.5 SDH四个亚基蛋白在结直肠癌原发灶和淋巴结转移灶中的表达  28
  2. SDHB蛋白表达结果与结直肠癌临床病理特征的关系  28-30
  3. 结直肠癌患者的生存分析  30-33
    3.1 生存情况  30
    3.2 临床病理参数与预后的关系  30-33
    3.3 SDH蛋白表达与患者预后之间的关系  33
  4. Western blot 检测 SDHB 与 HIF-1α在不同分化程度结直肠癌组织和结肠癌细胞中的表达  33-36
    4.1 SDHB与HIF-1α在不同分化程度结直肠癌组织中的表达  33-34
    4.2 SDHB与HIF-1α在结肠癌细胞系中的表达  34-35
    4.3 Western blot检测缺氧对HT-29细胞HIF-1α蛋白表达的影响  35-36
第三章讨论  36-42
结论  42-43
参考文献  43-57
致谢  57-58
攻读硕士学位期间发表的论文  58

线粒体琥珀酸脱氢酶复合物在结直肠癌中的表达及临床意义

内容摘要

全文目录

相似论文