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戊地昔布的抗肿瘤作用和机制研究

作　者: 李军霞
导　师: 王永利
学　校: 河北医科大学
专　业: 药理学
关键词: 戊地昔布环氧化酶-2 人胃癌BGC-823细胞凋亡小鼠肠癌clone 26细胞 Lewis肺癌人胃癌HGC-27细胞人卵巢癌SK-OV-3细胞
分类号: R73-3
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

流行病学的研究证据表明，长期服用阿司匹林等NSAIDs（非甾体抗炎药）可使肠道肿瘤发病率降低40-50%。NSAIDs的一个共同特点是可以抑制环氧化酶的活性。NSAIDs的确切的抗瘤机制仍不清楚。一些研究表明，NSAIDs的抑瘤作用与抑制COX-2（环氧化酶-2）有关。COX-2作为一个抗瘤作用的靶点引起了人们的高度重视。在动物和人肿瘤标本都证明，COX-2在肠道肿瘤，胰腺肿瘤，前列腺肿瘤，肺肿瘤等的表达比正常组织增多。COX-2在肿瘤形成早期如肠道息肉，腺瘤和细胞增生时就明显升高，提示COX-2在肿瘤形成过程中有重要作用。COX-2可增加肿瘤细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达进而抑制肿瘤细胞凋亡，增加促进侵袭和血管形成的因子MMP-2（基质金属蛋白酶-2），uPA（尿激酶），VEGF（血管内皮生长因子）等的表达而促进肿瘤血管形成，侵袭和转移。COX-2的产物PGE2可通过诱导T细胞无能，抑制NK（自然杀伤细胞）和CTL（细胞毒性T淋巴细胞）的活化，抑制IL-2（白介素-2）的产生和IL-2受体的表达，调节IL-12 和IL-10 的产生抑制机体免疫反应。但也有一些研究认为COX-2并非NSAIDs抗瘤作用的唯一靶点，原因如下：⑴COX-2抑制剂不仅抑制COX-2表达阳性的肿瘤细胞增生，也抑制COX-2表达阴性的肿瘤细胞增生。PGE2并不能反转NSAIDs对肠道肿瘤细胞株的生长抑制作用。⑵COX-2抑制剂在抑制COX-2活性的浓度下并不抑制肿瘤细胞的增生。⑶没有COX抑制活性的sulindac sulphone 也可抑制AOM诱发的大鼠肠道肿瘤形成。氟布洛芬的R-异构体不抑制COX活性，但可抑制Min 小鼠肠道息肉的形成。因此，人们认为，COX-2抑制剂抑制肿瘤细胞增生有两种机制，即依赖COX-2的机制和不依赖COX-2的机制。由于传统的NSAIDs对COX-2和COX-1的抑制没有选择性，用这些药物治疗可引起正常组织的损伤，尤其是对胃肠道的毒性。COX-1对维持胃肠道粘膜的稳定性有重要作用，抑制COX-1可引起胃出血，胃溃疡等副作用。因此，人们倾向用选择性COX-2抑制剂来治疗和预防肿瘤。戊地昔布是第二代COX-2选择性抑制剂，临床上已经用于抗炎止痛,<WP=5>胃肠道副作用小，但其是否也象阿司匹林一样具有抗肿瘤作用，目前尚无报道,本实验从离体和整体两个方面研究了戊地昔布的抗肿瘤作用,并探讨了其抗肿瘤作用的机制。第一部分戊地昔布的抑瘤作用与COX-2的关系目的: 检测戊地昔布对肿瘤的抑制作用及其与COX-2的关系。方法: Western blot和免疫细胞化学检测人胃癌BGC-823和HGC-27细胞、人卵巢癌SK-OV-3细胞和小鼠肠癌clone 26细胞是否有COX-2表达。MTT法用于测定戊地昔布，吲哚美辛，和SC-560对肿瘤细胞增殖的影响。用ELASA试剂盒测定clone 26细胞上清中PGE2（前列腺素E2）含量。结果:（1）Western blot和免疫细胞化学结果显示，BGC-823、HGC-27和 SK-OV-3细胞均无COX-2表达, clone 26 COX-2表达阳性。（2）戊地昔布可明显抑制四种肿瘤细胞的生长，72h后抑制BGC-823、HGC-27、 SK-OV-3和clone 26生长的IC50分别为：110.7、99.2、113.3和117.6μmol/L。(3)非选择性COX-2抑制剂吲哚美辛和选择性COX-1抑制剂SC-560也抑制BGC-823和clone 26细胞的生长。作用48h后，三种药物对BGC-823和clone 26细胞生长抑制程度由高到低的顺序，为戊地昔布、SC-560和吲哚美辛。对BGC-823细胞，当三种药物浓度为100μmol/L 时，抑制率依次为25.2%，18.4%，4.1%；200μmol/L时抑制率依次为32.4%，23.8%，16.7%。对clone 26细胞，100μmol/L 时抑制率依次为26.7%，22.8%，6.2%；200μmol/L时抑制率依次为39.6%，28.8%，20.1%。（4）PGE2本身对BGC-823和clone 26的生长没有影响，也不影响戊地昔布、SC-560和吲哚美辛对BGC-823和clone 26的生长抑制作用。（5）戊地昔布和吲哚美辛可明显降低clone 26上清的PGE2含量，在浓度分别为1.5625μmol/L和3.125μmol/L即明显降低PGE2的含量，但只有浓度达到25μmol/L和50μmol/L才抑制细胞生长。结论: 戊地昔布对COX-2表达阴性的BGC-823、HGC-27、SK-OV-3细胞和COX-2表达阳性的clone 26细胞都有生长抑制作用。吲哚美辛和SC-560也可抑制BGC-823和clone 26的生长，PGE2不影响戊地昔布的生长抑制作用。这些结果都提示戊地昔布抑制肿瘤细胞生长的作用与COX-2无关， <WP=6>第二部分戊地昔布抑制肿瘤细胞增生的可能机制目的: 探讨戊地昔布对BGC-823细胞和clone 26细胞生长抑制的作用机制方法: 用MTT法检测戊地昔布对BGC-823细胞和clone 26细胞生长的作用。用流氏细胞仪检测BGC-823细胞和clone 26细胞凋亡和细胞周期分布。用激光共聚焦显微镜、透射电镜和DNA片段分析进一步检测BGC-823细胞凋亡。LDH试剂盒检测BGC-823细胞上清中LDH的含量。Western blot检测BGC-823细胞和clone 26细胞Caspase-3，PCNA和COX-2的表达。结果：（1）戊地昔布对BGC-823细胞和clone 26细胞生长的影响呈时间和浓度依赖性， 25 μmol/L戊地昔布即可明显抑制BGC-823细胞和clone 26细胞生长，72 h后抑制率达24.0%和28.8%, 随着药物浓度增加和作用时间延长，对BGC-823细胞和clone26细胞增殖的抑制率也提高，400 μmol/L戊地昔布72h后抑制率分别可达 92.0 %和91.1%，几乎完全抑制细

全文目录

中文摘要  4-10
英文摘要  10-17
英文缩写  17-18
研究论文戊地昔布的抗肿瘤作用和机制研究  18-84
  引言  18-20
  第一部分戊地昔布的抑瘤作用与COX-2关系  20-43
    前言  20
    材料与方法  20-27
    结果  27-29
    附图  29-34
    附表  34-38
    讨论  38-40
    小结  40
    参考文献  40-43
  第二部分戊地昔布抑制肿瘤细胞增生的可能机制  43-65
    前言  43
    材料与方法  43-47
    结果  47-50
    附图  50-59
    附表  59-61
    讨论  61-62
    小结  62
    参考文献  62-65
  第三部分戊地昔布抑制Lewis肺肿瘤的生长  65-83
    前言  65
    材料与方法  65-68
    结果  68-70
    附图  70-77
    附表  77-79
    讨论  79-80
    小结  80
    参考文献  80-83
  结论  83-84
综述  84-100
致谢  100-101
个人简历  101

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