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米非司酮通过上调Smac促进凋亡逆转卵巢癌耐药的实验研究

作　者: 高宝荣
导　师: 张虹
学　校: 天津医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 卵巢癌 米非司酮 耐药 逆转 Smac 凋亡
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：通过体外实验观察米非司酮对卵巢癌耐药细胞系SKOV3/DDP耐药性的影响,并对可能存在的相关机制进行探讨。方法：1.采用MTT法检测米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3及耐药细胞系SKOV3/DDP的细胞毒性作用,通过绘制量-效曲线筛选出细胞抑制率<5%时的非细胞毒性剂量,并将该剂量作为本实验的逆转剂量。同法,测定逆转剂量的米非司酮与DDP联合作用于SKOV3/DDP细胞后,细胞顺铂耐药性的变化。2.通过流式细胞仪(FCM)检测逆转剂量的米非司酮作用于SKOV3/DDP细胞前后不同时间点细胞周期的变化情况。3.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印记技术(Western Blot)检测Smac在SKOV3及SKOV3/DDP两种细胞系中InRNA及蛋白水平表达的差异,并进一步检测逆转剂量的米非司酮作用于SKOV3/DDP细胞后Smac mRNA及蛋白水平的表达变化。结果：1.MTT的结果显示：米非司酮对SKOV3及SKOV3/DDP细胞均有抑制作用,并呈现剂量依赖性。当米非司酮的浓度<5μM时,其对SKOV3及SKOV3/DDP两种细胞系均无明显的抑制作用(细胞的抑制率均<5%),且经方差分析,5μM时细胞的抑制率与低浓度组的抑制率有显著性差异,故将5μM作为本实验的逆转剂量。将逆转剂量的米非司酮与DDP联合作用于SKOV3/DDP细胞后,细胞对顺铂的耐药性得以逆转,于24、48、72 h测得的逆转倍数分别为1.36、1.91、2.48倍。2.FCM检测结果显示：5μM的米非司酮分别作用于SKOV3/DDP细胞24、48、72 h后,随着作用时间的延长,细胞周期中G0/G1期所占的比例逐渐增加(48.7%、53.9%、55.1%、59.0%),而S期所占的比例则逐渐减小(13.5%、9.6%、7.7%、5.8%),细胞受阻于G0/G1期。3. RT-PCR结果显示：SKOV3与SKOV3/DDP细胞系Smac mRNA表达量的相对值(Smac mRNA/β-actin mRNA)具有显著性差异(1.00±0.05 vs 0.45±0.04,P<0.01),将5μM米非司酮作用于SKOV3/DDP细胞24、48、72h后Smac mRNA表达量的相对值随着作用时间的延长而逐渐增加,分别为0.50±0.03、0.65±0.06、0.73±0.04,各组间差异具有统计学意义(p<0.05),且与作用前相比Smac mRNA表达量的相对值显著增加,但仍小于SKOV3细胞表达量的相对值(P<0.05)。4. Western Blot结果显示SKOV3 Smac蛋白表达量的相对值(Smac/β-actin)显著高于SKOV3/DDP (0.67±0.03 vs 0.40±0.03,P<0.01)。5μM米非司酮作用SKOV3/DDP细胞24、48、72 h后Smac蛋白表达量的相对值随着作用时间的延长而逐渐增加,分别为0.42±0.01、0.46±0.01、0.50±0.02,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。24 h较作用前无显著差别(P>0.05),48 h及72 h时分别较作用前Smac蛋白的表达量显著增加,但仍小于SKOV3细胞的相对值(P<0.05)。结论：1.米非司酮对SKOV3及SKOV3/DDP细胞生长具有抑制作用,且呈现剂量依赖性。5μM的米非司酮对SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药性具有一定的逆转作用,且呈现时间-效应关系。2.米非司酮逆转SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性的可能机制为：米非司酮使SKOV3/DDP细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制细胞的增殖；通过上调Smac基因及蛋白水平的表达,促进卵巢癌耐药细胞的凋亡,进而间接逆转耐药。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语  10-11
前言  11-13
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-13
对象和方法  13-26
  1 研究对象  13
  2 实验材料  13-15
  3 实验方法  15-24
  4 统计学方法  24-26
结果  26-34
  1 SKOV3及SKOV3/DDP镜下形态比较  26
  2 SKOV3/DDP的耐药指数  26-27
  3 MIF对SKOV3及SKOV3/DDP的细胞毒性浓度分析  27-28
  4 MIF对SKOV3/DDP细胞耐药性的逆转作用  28-30
  5 MIF作用于SKOV3/DDP前后细胞周期的变化情况  30-31
  6 MIF对SKOV3/DDP细胞Smac mRNA表达水平的影响  31-32
  7 MIF对SKOV3/DDP细胞Smac蛋白表达水平的影响  32-34
讨论  34-43
  1 米非司酮的药理学特点及对肿瘤细胞增殖的影响  34-35
  2 米非司酮的细胞毒性剂量和逆转剂量  35-36
  3 米非司酮对卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的耐药逆转作用及机制分析  36-42
  4 米非司酮逆转耐药的临床可行性  42
  5 展望  42-43
结论  43-44
参考文献  44-50
发表论文和参加科研情况说明  50-51
综述  51-67
  综述参考文献  61-67
致谢  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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