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胰岛素对烟雾吸入性损伤大鼠肺组织抗凋亡作用

作　者: 李志飞
导　师: 张建明
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 吸入性损伤 胰岛素 细胞凋亡 凋亡指数 Bcl-2 Bax
分类号: R644
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的吸入性损伤后其发病机制复杂,使其成为烧伤主要死亡原因之一,其病理生理学机制与细胞凋亡密切相关。本实验以烟雾吸入性损伤大鼠为模型,给予大鼠皮下注射胰岛素,同时以吸入性损伤组大鼠为对照,在相同部位注射等容量生理盐水。分别在不同的时相点测量大鼠肺组织中的凋亡指数(apoptosis index AI)、调控细胞凋亡的蛋白质如Bax和Bcl-2的表达变化,以及肺组织病理形态的改变,来探讨胰岛素对早期肺组织细胞凋亡的影响及对肺组织的保护作用。方法将成年清洁级SD大鼠66只,体重(200±20)g,随机分为3组,正常对照组6只、吸入性损伤组(损伤+生理盐水)和胰岛素治疗组(损伤+胰岛素)各30只,其中吸入性损伤组和胰岛素治疗组又随机分为2h、6h、12h、24h、48h、五个组。胰岛素治疗组是烟雾吸入致伤后于皮下注射胰岛素5U/kg,吸入性损伤组烟雾吸入致伤后于相同部位注射等体积的生理盐水,正常对照组不做致伤处理,并在2h、6h、12h、24h、48h监测血糖值。光镜进行肺组织切片病理形态学观察。采用原位末端标记法(Terminal-deoxynucleoitidyl Transferase Mediated Nick End Labeling TUNEL)检测大鼠肺组织的AI,免疫组织化学染色法检测抗凋亡蛋白Bcl-2及Bax的表达变化。结果1大鼠烟雾吸入性损伤后一般情况观察：各组间动物比较体重无统计学意义。大鼠在经过特殊装置烟雾吸入性损伤时出现呼吸急促,肺部听诊湿罗音,心率加快,取出放入室内空旷区休息30分钟后上述表现逐渐减轻,而正常对照组在静息状态下呼吸平稳,无气促及呼吸困难等症状。2各组大鼠血糖水平变化：吸入性损伤组大鼠血糖2h略微升高,胰岛素治疗组血糖降低,与吸入性损伤组比较差异明显(P<0.05),胰岛素治疗组6h血糖值与正常对照组比较降低(P<0.05)。与吸入性损伤组比较(P<0.01)。12h胰岛素治疗组血糖回升到正常,3组血糖组间比较(P>0.05)。3大鼠肺组织肉眼及光学显微镜观察肺病理变化：正常对照组各时段大鼠肺组织粉红色,表面光滑、红润,无出血斑及出血点,无充血水肿；吸入性损伤组大鼠12h及24 h肺组织呈暗红色,体积增大膨胀,肺表面湿润,渗出较多,可见弥漫性充血水肿,部分肺组织有淤血表现；胰岛素治疗组大鼠12h及24 h肺组织与吸入性损伤组比较充血水肿减轻,肺组织淤血较少。吸入性损伤组大鼠48h肺组织暗红色较前两时段减轻,可见出血斑、出血点,胰岛素治疗组大鼠48h肺组织与吸入性损伤组比较水肿减轻。4各组大鼠在不同的时相点肺组织细胞凋亡变化以及Bax、Bcl-2和Bcl-2/Bax值表达的改变TUNEL染色结果显示凋亡指数在：胰岛素治疗组和吸入性损伤组与正常对照组比较(P<0.01),胰岛素治疗组和吸入性损伤组在伤后2h(P>0.05),6h后各时相点,胰岛素治疗组与吸入性损伤组相比,凋亡细胞明显减少,且各时相点均较正常组明显升高,24小时各值达高峰(P<0.01)。免疫组化结果显示：Bcl-2和Bax在胰岛素治疗组和吸入性损伤组与正常对照组比较,各个组间差异均(P<0.01)。Bcl-2在吸入性损伤组和胰岛素治疗组2h升高,并24h以后维持在较高水平,2h、6h胰岛素治疗组与吸入性损伤组比较差异不明显(P>0.05),6h后各组间比较差异显著(P<0.01)。Bax在2h胰岛素治疗组和吸入性损伤组无差别(P>0.05),2h后各组间比较差异均具有显著性(P<0.01)。吸入性损伤后早期给予胰岛素可以直接促进Bcl-2转录,抑制Bax等促凋亡基因的表达,引起Bcl-2表达的升高和Bax表达的降低,可以有效抑制吸入性损伤后早期肺脏组织细胞凋亡。结论吸入性损伤后早期给予胰岛素可以直接促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax等促凋亡蛋白的表达,引起Bcl-2蛋白表达的升高和Bax蛋白表达的降低,即Bcl-2/Bax值升高。AI值降低。从而可以有效抑制吸入性损伤后早期肺脏组织细胞凋亡,减轻肺损伤,达到了保护肺组织目的。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-11
缩略语/符号说明  11-13
前言  13-16
  研究现状、成果  13-14
  研究目的、方法  14-16
1 对象和方法  16-22
  1.1 主要试剂与仪器  16-17
  1.2 实验动物及致伤设备  17
  1.3 实验方法  17-18
  1.4 检测指标与检测方法  18-22
2 结果  22-28
  2.1 大鼠烟雾吸入性损伤后一般情况观察  22
  2.2 各组各时段大鼠血糖检测  22-23
  2.3 大鼠肺组织肉眼观察及光学显微镜观察肺病理变化  23-24
  2.4 肺组织细胞凋亡的改变  24-25
  2.5 肺组织Bcl-2、Bax和Bcl-2/Bax值的改变  25-28
3 讨论  28-39
  3.1 研究背景  28-30
  3.2 于大鼠烟雾吸入性损伤实验模型的致伤效果  30-31
  3.3 胞凋亡在吸入性肺损伤中的作用  31-35
  3.4 岛素在抗细胞凋亡中的作用  35-38
  3.5 在烟雾吸入性损伤大鼠早期应用胰岛素  38-39
小结  39-40
结论  40-41
参考文献  41-47
发表论文和参加科研情况说明  47-48
附录  48-60
综述 胰岛素在抗凋亡方面的新进展  60-75
  综述参考文献  70-75
致谢  75

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 创伤外科学 > 烧伤及烫伤（灼伤）
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