学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

BDNF基因RNA干扰在帕金森氏病发病机制中的作用观察

作　者: 卢海燕
导　师: 肖杭；高蓉；丁海霞
学　校: 南京医科大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 帕金森病脑源性神经营养因子 siRNA PC12细胞凋亡氧化应激
分类号: R742.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 32次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

第一部分PC12细胞培养鉴定与BDNF基因RNA干扰效率的测定目的探讨PC12细胞增殖活性、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)RNA干扰效率及其对BDNF基因表达水平的影响。方法设计并合成针对BDNF mRNA序列的小片段干扰RNA(siRNA),利用lipofectamine 2000将siRNA转染入PC12细胞中或给与6-OHDA损伤,给与/不给予BDNF蛋白保护,利用CCK8试剂盒检测细胞增殖,采用免疫荧光法检测BDNF基因RNA干扰效率,实时定量PCR检测BDNF基因RNA干扰对BDNF mRNA表达的影响。结果PC12细胞增殖良好,BDNF干扰效率达到95%,转染siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达量比正常组细胞减少73%,而转染作为对照的scrambled siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达没有明显变化。结论BDNF基因下调可以降低PC12细胞对BDNF mRNA的表达水平,给予BDNF蛋白保护后可以上调mRNA的表达,从而为下一步研究奠定了基础。第二部分BDNF基因RNA干扰对PC12细胞凋亡及其信号转导通路的作用研究目的探讨BDNF基因RNAi在PC12细胞凋亡中的作用。方法设计并合成针对BDNF mRNA序列的siRNA,利用lipofectamine 2000将siRNA转染入PC12细胞中或给与6-OHDA损伤,给与/不给予BDNF蛋白保护,采用流式细胞仪法检测siRNA对细胞凋亡的影响,Western blotting验证BDNF是否通过bcl-2通路参与PC12细胞凋亡。结果BDNF基因RNA干扰与6-OHDA神经毒性一样可诱导PC12细胞凋亡。给予BDNF蛋白保护后细胞毒性减轻。BDNF基因RNAi通过bcl-2通路可以降低bcl-2的表达、提高bax的表达,给予BDNF蛋白后bcl-2表达上调,bax表达下调。结论BDNF基因下调可以通过bcl-2通路诱导PC12细胞的凋亡。第三部分BDNF基因RNA干扰对PC12细胞氧化应激作用的研究目的探讨BDNF基因RNAi在PC12细胞氧化应激中的作用。方法利用lipofectamine 2000将siRNA转染入PC12细胞中或给与6-OHDA损伤,给与/不给予BDNF蛋白保护,采用ROS、MDA试剂盒检测活性氧和脂质过氧化物的表达水平。结果BDNF siRNA明显增加脂质过氧化物和羟自由基的产生,给予BDNF蛋白后表达明显降低,而Scrambled siRNA则没有明显变化,6-OHDA组也产生较多的脂质过氧化物和羟自由基,与文献报道相符,且BNDF对其具有保护作用。结论BDNF基因下调可以导致PC12细胞氧化应激增强,BDNF蛋白对PC12细胞有保护作用。

全文目录

缩略词  4-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-17
第一部分 PC12细胞培养鉴定与BDNF基因RNA干扰效率检测  17-33
  材料和方法  18-28
  结果  28-31
  讨论  31-33
第二部分 BDNF 基因RNA干扰对PC12细胞凋亡及其信号转导通路的作用  33-51
  材料与方法  34-46
  结果  46-49
  讨论  49-51
第三部分 BDNF基因RNA干扰对PC12细胞氧化应激的作用  51-60
  材料与方法  52-55
  结果  55-58
  讨论  58-60
小结  60-61
参考文献  61-67
论文发表情况  67-68
附录  68-69
致谢  69-70
综述 KATP通道在PD发病机制中的作用研究  70-80
  参考文献  77-80

BDNF基因RNA干扰在帕金森氏病发病机制中的作用观察

内容摘要

全文目录

相似论文