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链霉菌SM037抑制绿脓杆菌活性物质合成条件及提取方法研究

作　者: 赵文婷
导　师: 唐欣昀
学　校: 安徽农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 链霉菌抑菌活性物质分类鉴定发酵条件分离纯化
分类号: R915
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

从La含量为1400ppm的土壤中筛选对绿脓杆菌有抑制活性的放线菌株,其中菌株SM037的抑制活性较高,并且对金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、鸡白痢、大肠杆菌、白色念珠菌均有抑菌作用,是一株具有广谱抗菌活性的菌株,因此实验对SM037进行了进一步的研究。根据SM037菌株在高氏1号上的菌丝形态、孢子形状;在不同培养基上的培养特征及明胶液化、淀粉水解、纤维素上生长情况、H2S的产生、碳源利用等一系列生理生化特征,将SM037菌株归类为金色类群,初步鉴定为黄雀链霉菌黄雀变种。为提高抑菌活性物质的产量,对SM037的液体培养基成分进行了优化。通过杯碟法检测发酵液中活性物质的含量,筛选出最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为硝酸钾;通过改变碳、氮比的实验及关于碳、氮源及磷酸盐的正交实验,获得碳源、氮源及磷酸盐配比为:可溶性淀粉4%,KNO3 0.2%,K2HPO4 0.05%。发酵工艺条件的研究结果表明最适初始pH为7.5~8.0,最适温度为28℃,最适接种量为7%,250ml的三角瓶装入50 ml为最佳装液量,最适接种菌龄48h。在优化后的培养基和最佳发酵条件下,96～108h抑菌活性物质的分泌量达到最高峰。经过培养基和发酵条件的优化,发酵液中抑菌活性物质的效价由原来的326u·ml-1提高至1592u·ml-1。发酵液的抑菌活性物质在60℃水浴30min后仍然稳定,在70℃时开始变性,80~121℃活性丧失较快。在碱性条件下,发酵液的抑菌活性能力随着pH值逐渐上升而缓慢减少;在酸性条件下,随着pH逐渐下降,抑菌活性降低较快。实验说明,该抑菌活性物质在碱性条件下较稳定,在酸性条件下不稳定。对发酵液进行醇沉、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析、GF254硅胶板薄层分析等方法进行活性物质的分离纯化,用质谱检测活性物质的分子量,发现活性物质中主要含有三个信号较强的物质,分别记为S-I,S-II,S-III。对S-I,S-II,S-III的二级质谱进行分析,结合天然活性物质库查询,推测S-I,S-II,S-III的可能分子式为C10H15N3O3 ,C17H28N8O8,C24H52N8O2分别为抗生素Eulicin,Cairomycin B和Antibiotic LL-AC 541。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
综述  7-13
  1 链霉菌抗生素生物合成基因表达与调节  7-9
  2 绿脓杆菌致病作用和抗药性  9-10
  3 稀土对生物机体效应机理的研究  10-13
1 引言  13-15
  1.1 研究价值和理论依据  13
  1.2 本论文拟解决的问题  13-15
2 材料与方法  15-23
  2.1 材料  15-17
  2.2 方法  17-23
3 结果与分析  23-44
  3.1 菌株分离筛选  23
  3.2 SM037 的分类鉴定  23-25
  3.3 链霉菌SM037菌株培养条件的优化  25-34
  3.4 发酵液抑菌效果的稳定性实验  34-35
  3.5 发酵液抑菌谱的测定  35-36
  3.6 代谢活性产物的提取工艺  36-44
4 讨论  44-47
  4.1 菌株的初筛及其分类鉴定  44
  4.2 抑菌物质的活性检测  44-45
  4.3 发酵条件研究  45-46
  4.4 抑菌活性物质的提取与纯化  46-47
5 结论  47-49
  5.1 活性菌株的筛选  47
  5.2 菌种的鉴定  47
  5.3 培养基优化  47
  5.4 发酵工艺条件的研究  47
  5.5 抑菌活性物质产生时间的研究  47
  5.6 活性物质的稳定性研究  47-48
  5.7 活性物质的分离纯化  48-49
参考文献  49-54
致谢  54-55
作者简介  55

链霉菌SM037抑制绿脓杆菌活性物质合成条件及提取方法研究

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