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白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的分离纯化及酶学表征

作　者: 武国栋
导　师: 杨青
学　校: 大连理工大学
专　业: 生物化工
关键词: 长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶纯化表征
分类号: TQ464.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 158次
引　用: 2次
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内容摘要

蛇毒类凝血酶属于蛇毒丝氨酸蛋白酶家族。它可以将纤维蛋白原转化为纤维蛋白。由它所产生的纤维蛋白侧链不发生交联,容易被纤溶系统所降解,所以它具有降低血液粘度的功能。也因此类凝血酶在血栓的防治,心肌梗死方面有很广泛的应用。本实验运用阳离子交换,凝胶过滤和阴离子交换层析技术从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出两种具有纤维蛋白原降解活性的酶:酶Ⅰ和酶Ⅱ。两种酶都具有精氨酸酯酶活性和纤维蛋白原凝结活性。这两种酶的精氨酸酯酶活性可被苯甲基磺酰氟(PMSF),苯甲脒(Benzamidine)和L-苯甲磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK)所抑制,而不被乙二胺四乙酸(EDTA)抑制。酶Ⅰ可释放少量的血纤肽A,不释放血纤肽B。而酶Ⅱ除释放血纤肽A外,还释放少量血纤肽B。在与纤维蛋白原降解实验中发现,酶Ⅰ和酶Ⅱ都能首先降解纤维蛋白原α链,后降解纤维蛋白原β链,酶Ⅰ降解纤维蛋白原的速度比酶Ⅱ快。酶Ⅱ在与纤维蛋白原共浴24小时后发现其能降解γ链。SDS-PAGE电泳显示两种酶都为单肽链,酶Ⅰ和酶Ⅱ的分子量分别为34kDa和38kDa。用BAEE做底物来测其最适pH和最适温度显示,酶Ⅰ和酶Ⅱ的最适pH值为8.0,酶Ⅰ的最适温度为60℃,酶Ⅱ的最适温度为50℃。N端序列显示酶Ⅱ和以往得到的类凝血酶具有高度的同源性。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
引言  8-9
1 文献综述  9-22
  1.1 蛇毒简介  9
  1.2 蛇毒类凝血酶  9-11
    1.2.1 蛇毒类凝血酶的研究进程  10
    1.2.2 蛇毒类凝血酶的分布  10
    1.2.3 蛇毒类凝血酶的分类  10-11
  1.3 蛇毒类凝血酶的性质  11-15
    1.3.1 理化性质  11-13
    1.3.2 药理作用  13-15
  1.4 临床应用  15-16
  1.5 蛇毒类凝血酶的制备  16-20
  1.6 长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶的研究概况  20-22
    1.6.1 白眉蝮蛇简介  20
    1.6.2 白眉蝮蛇蛇毒的一般理化性质  20
    1.6.3 白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的研究进程  20-21
    1.6.4 临床应用及问题  21-22
2 实验材料和方法  22-27
  2.1 实验药品和仪器  22
  2.2 实验方法  22-27
    2.2.1 天然蛇毒类凝血酶的分离纯化  22-23
    2.2.2 纤维蛋白原凝结活性测定  23
    2.2.3 精氨酸酷酶活力测定  23
    2.2.4 酶抑制活性测定  23
    2.2.5 SDS-PAGE电泳分析  23-24
    2.2.6 纤维蛋白原降解活性测定  24
    2.2.7 蛋白浓度测定  24-25
    2.2.8 血纤肤释放测定  25
    2.2.9 N端序列测定  25-27
3 结果与讨论  27-43
  3.1 实验结果  27-39
    3.1.1 天然蛇毒类凝血酶的分离纯化  27-33
    3.1.2 分子量鉴定  33
    3.1.3 酶抑制剂作用  33-34
    3.1.4 纤维蛋白原降解活性鉴定  34-35
    3.1.5 血纤肤释放鉴定  35-36
    3.1.6 最适温度和最适 PH值  36-37
    3.1.7 N端测序结果  37-39
  3.2 讨论  39-43
结论  43-44
参考文献  44-52
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  52-53
致谢  53-54
大连理工大学学位论文版权使用授权书  54

白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的分离纯化及酶学表征

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