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人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达及对巨噬细胞分泌功能与凋亡的影响

作　者: 蒋永林
导　师: 万艳平
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 人乳头瘤病毒16型(HPV 16) E6蛋白 巨噬细胞 细胞因子 凋亡
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 49次
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内容摘要


目的：构建人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E6蛋白真核表达载体pcDNA3.1(-)／E6，研究E6蛋白瞬时高表达对LPS诱导的THP-1巨噬细胞细胞因子分泌及地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡的影响，为进一步研究E6蛋白在HPV16致癌机理中的作用提供一定的实验依据。 方法：用Primer5.0引物设计软件设计引物，聚合酶链反应(PCR)扩增HPV16 E6基因。将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接，经蓝白斑筛选、双酶切鉴定及测序分析后，亚克隆至pcDNA3.1(-)真核表达载体中；重组质粒经双酶切鉴定后转染THP-1巨噬细胞，SDS-PAGE与Western-blotting鉴定E6蛋白在THP-1巨噬细胞中的表达；将pcDNA3.1(-)／E6转染THP-1巨噬细胞，转染后24h加入终浓度为100ng／mL的LPS诱导，分别在诱导后12h、24h、48h收集培养上清用ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的含量，并用显微计数法观察E6蛋白瞬时高表达对地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡的影响。利用统计软件SPSS12.0对实验数据作统计分析。 结果： (1)PCR产物克隆至pUCm-T载体上后，双酶切及测序结果表明所克隆的目的片段与GenBank上公布的HPV16 E6基因序列完全一致，将该目的片段亚克隆至真核载体pcDNA3.1(-)上，所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)／E6转染THP-1巨噬细胞，SDS-PAGE与Western-blotting结果显示pcDNA3.1(-)／E6可以在THP-1巨噬细胞中表达分子量约为18KD的E6蛋白。 (2)pcDNA3.1(-)／E6+LPS组培养上清中TNF-α、IL-1 β的量明显低于巨噬细胞+LPS

全文目录


主要英文缩略语索引  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
论文正文  10-40
  1. 前言  10-13
  2. 实验材料  13-16
  3. 实验方法  16-26
  4. 结果  26-36
  5. 讨论  36-39
  6. 结论  39-40
参考文献  40-43
附录  43-45
综述  45-58
研究成果及发表文章  58-59
致谢  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒）
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