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枯草芽孢杆菌B11菌株分泌的拮抗物质的纯化及基因文库的构建

作　者: 蒙显英
导　师: 黎起秦；冯家勋
学　校: 广西大学
专　业: 植物病理学
关键词: 枯草芽孢杆菌B11菌株拮抗物质纯化抗菌谱理化特性作用机理基因文库
分类号: S476.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

从土壤中分离得到的枯草芽孢杆菌B11菌株对西瓜枯萎病菌有较强的抑制作用,其抑制机制之一是产生拮抗物质。本研究对B11菌株分泌的拮抗物质进行纯化,测定其特性及抑菌机制,并构建B11菌株的基因文库,取得的结果如下: 通过煮沸、DEAE 52阴离子交换层析和氧化铝吸附层析,将B11菌株分泌的两种拮抗物质(拮抗物质A、B)纯化到薄层层析斑点纯。两种拮抗物质对蛋白酶K和胃蛋白酶稳定,拮抗物质A对胰蛋白酶也稳定,但拮抗物质B对胰蛋白酶部分敏感。这两种拮抗物质均能耐高温,在121℃仍能保持活性不变。两种拮抗物质对尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f. sp. niveum)、水稻黄单胞菌水稻变种(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)13751菌株、茄青枯拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum)P13菌株和水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)均有较强烈的抑制作用,但拮抗物质A对水稻稻灰梨孢菌(Pyricularia grisea)没有抑制作用;而拮抗物质B对水稻稻灰梨孢菌(Pyricularia grisea)有较强烈的抑制作用。处理浓度为4.92μg/mL的拮抗物质A处理尖孢镰刀菌西瓜专化型120h后对菌丝生长的抑制率达

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摘要  3-5
英文摘要  5-10
1 前言  10-16
  1.1 国内外研究状况  10-15
  1.2 研究的目的和意义  15-16
2 材料和方法  16-27
  2.1 材料  16-19
    2.1.1 供试菌株  16
    2.1.2 培养基、培养条件和抗生素  16-18
    2.1.3 常规溶液、缓冲液和试剂  18-19
  2.2 方法  19-27
    2.2.1 枯草芽孢杆菌B11菌株分泌的拮抗物质的纯化  19-20
      2.2.1.1 枯草芽孢杆菌B11菌株拮抗物质的提取  19
      2.2.1.2 DEAE 52阴离子交换层析  19
      2.2.1.3 氧化铝吸附层析  19-20
      2.2.1.4 蛋白质含量的测定和计算  20
      2.2.1.5 硅胶薄层层析  20
    2.2.2 拮抗物质理化特性的研究  20
    2.2.3 拮抗物质抗菌谱的测定  20-21
    2.2.4 拮抗物质对尖孢镰刀菌西瓜专化型菌丝生长的抑制作用  21
    2.2.5 拮抗物质对尖孢镰刀菌西瓜专化型孢子形成的影响  21
    2.2.6 拮抗物质抑菌机制的测定  21-22
    2.2.7 枯草芽孢杆菌B11菌株基因文库的构建  22-27
3 结果与分析  27-45
  3.1 枯草芽孢杆菌B11菌株分泌的拮抗物质的纯化  27-31
    3.1.1 枯草芽孢杆菌B11菌株拮抗物质的提取  27
    3.1.2 拮抗物质的纯化  27-29
    3.1.3 活性峰组分的硅胶薄层层析检测  29-30
    3.1.4 拮抗物质的纯化表  30-31
  3.2 拮抗物质的理化特性研究  31-32
  3.3 拮抗物质的抗菌谱  32
  3.4 拮抗物质对尖孢镰刀菌西瓜专化型菌丝生长的抑制作用  32-35
  3.5 拮抗物质对尖孢镰刀菌西瓜专化型分生孢子形成的抑制作用  35
  3.6 拮抗物质的抑菌机制  35-42
  3.7 枯草芽孢杆菌B11菌株基因文库的构建  42-45
    3.7.1 基因文库的构建  42-43
    3.7.2 基因文库质量的检测  43-45
4 小结与讨论  45-47
参考文献  47-53
致谢  53-54
攻读硕士论文期间发表的论文  54

枯草芽孢杆菌B11菌株分泌的拮抗物质的纯化及基因文库的构建

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